ГОСТ Р 53220—2008
7.1.3 Приготовление растворов для электрофореза
7.1.3.1 Приготовление раствора А
Навеску акриламида массой 30 ги навеску N. N’-метиленбисакриламида (МБА) массой0.15 г раст
воряютв мерной колбе вместимостью 100 см3внебольшом количестведистиллированной воды идово
дят объем растворадистиллированной водойдо метки.
7.1.3.2 Приготовление раствора В
Навеску ТРИС массой 18.2 г и навескудодецилсульфата натрия (СДС) массой 0,4 г растворяют в
мерной колбе вместимостью 100 см3в небольшом количестведистиллированной воды, устанавливают
pH =8.8 добавлением концентрированной соляной кислоты и доводят объем растворадистиллирован
ной водойдо метки.
7.1.3.3 Приготовление раствора С
Навеску ТРИС массой 9,1 г и навеску СДС массой 0.4 г растворяют в мерной колбе вместимостью
100 см3внебольшом количестведистиллированной воды, устанавливаютpH =6,8добавлением концен
трированной соляной кислоты идоводятобъем растворадистиллированной водой до метки.
7.1.3.4 Приготовлениераствора D
Навеску аммония персульфата (АПС) массой 0.125 г растворяют в 1,23 см3дистиллированной
воды.
7.1.3.5 Приготовление раствора Е
Навеску акриламида массой 30.0 г и навеску МБА массой 0.8 г растворяютв мерной колбе вмести
мостью 100 см3 в 50—60 см3дистиллированной воды идоводятдистиллированной водойдо метки.
7.1.4 Приготовление электродного буфера 1:4
7.1.4.1 Приготовление20 %-ного раствора СДС
Навеску СДС массой 20,0 г смешивают в химическом стакане с 80 см3дистиллированной воды до
полного растворения соли.
7.1.4.2 В мерную колбувместимостью 2 дм3помещаютнавеску24.0г ТРИС инавеску115.0г глици
на, добавляют40 см320 %-ногораствора СДС. доводятобъемдо метки дистиллированнойводойи пере
мешиваютдо полного растворения компонентов.
7.1.5 Приготовление окрашивающего раствора для геля
К навеске красителя Кумасси R-250массой 1,1 г приливают200 см3этилового спирта, 50 см3уксус
ной кислоты, 200см3дистиллированной воды иперемешиваютвхимическомстаканедо полногораство
рения.
7.1.6 Приготовлениеобесцвечивающего раствора
К 500 см3этилового спирта приливают 350 см3 уксусной кислоты и2 дм3дистиллированной воды.
7.1.7 Приготовление буфера для растворения белковых проб
7.1.7.1 Приготовление0,05 %-ного раствора бромфеноловогосинего
Навеску 0,05 г бромфенолового синего смешивают в химическом стакане с 99.95 см3дистиллиро
ванной воды.
7.1.7.2 К 0.4 см3 2-меркаптоэтанола поочередно приливают 0.8 см3 20 %-ного раствора СДС,
0.4 см3ТРИС-буфера, 0.8 см3 0,05 %-ного раствора бромфенолового синего, 5 см3 дистиллированной
воды и 5 см3 глицерина.
Растворы используют свежеприготовленные, допускается их хранение при температуре 4 ®Сне
болеедвух суток.
7.1.8 Приготовление раствора маркерных белков с молекулярной массой 27000—180000
с массовой концентрацией белка 1 мкг/мкл
В пластиковой пробирке типа «Эппендорф» растворяют навеску массой 50,0 мкг готовой смеси
маркерныхбелковс молекулярной массой 27000—180000 в 50.0 мкл буферадля растворения белковых
проб. Раствор сохраняют при минус20 °С в течение одной недели.
7.1.9 Приготовление фиксирующего раствора
Навеску 12.5 г трихлоруксусной кислоты растворяют в химическом стакане в 87.5 см3дистиллиро
ванной воды и получают 12,5 %-ный раствор трихлоруксусной кислоты.
7.1.10 Приготовление растворовдля получения полимерного геля
7.1.10.1 Приготовление растворадля нижнего сепарирующего геля
18.0см3раствора А, 7,5 см3раствора В. 4,3 см3 дистиллированной воды, 0,01 см3ТЕМЕД, 0.2 см3
раствора Dсмешивают в химическом стакане непосредственно перед использованием.
7.1.10.2 Приготовление растворадля верхнего формирующего геля
В химическом стакане смешивают 1.3 см3 раствора Е. 2,5 см3 раствора С, 6.2 см3дистиллирован
ной воды. 0,01 см3ТЕМЕД. 0,1 см3раствора D.
Растворы используют немедленно после приготовления.
4