ГОСТ Р 53046—2008
4.3.10.1 Для приготовления основного раствора ферментного препарата берут его навеску мас
сой от0,1 до 10 г*сточностьюдо0,2 мг и суспендируютвнебольшом количестведистиллированной воды
(до 50 см3) на магнитной мешалке в течение 15 мин (порошок, измельченные микрогрануляты и др.) или
60 мин (корма, кормовые смеси). Суспензию количественно переносят в мерную колбу вместимостью
200 см3идоводят объем дистиллированной водой до метки. Полученную суспензию центрифугируют
при частоте вращения 7000 мин-1в течение 15 мин.Для анализа используют надосадочную жидкость.
4.3.10.2 Рабочий растворготовят из основного раствораферментногопрепаратапутем его разве
дения вдистиллированной воде (например, в 10 раз)таким образом, чтобы при определенииактивности
оптические плотности опытного иконтрольного растворов находились в пределахрабочей зоны градуи
ровочного графика.
4.4Проведение анализа
4.4.1 Анализ проводят вдвух параллельныхопределениях.
4.4.2 В три пробирки (две опытные и одна контрольная) помещают по полоске бумаги для хрома
тографии массой 98—102 мг (размером 1.5х 8.0 см), сложенной гармошкой, заливают 2 см3ацетатного
буферного раствора и перемешивают. Пробирки закрывают пробками, помещают в ультратермостат с
температурой (50J. 1)вС ивыдерживают в течение 10 мин.
4.4.3 Вдве опытные пробирки добавляют по 2 см3рабочего раствора ферментного препарата с
той же температурой и перемешивают. Все три пробирки помещают в ультратермостат с температурой
(50± 1) С ивыдерживают в течение 60 мин.
4.4.4 При определении восстанавливающих сахаров по методус ДНС-реактивом после проведе
ниягидролиза издвух пробирок(опытныепробы) отбираютпо 1см3реакционной смесивчистые пробир
ки. В третью пробирку (контрольную) вносят 2 см3 рабочего раствора, перемешивают и сразу же
отбирают 1см3смеси в чистую пробирку.
Во все три пробирки (две опытные и одну контрольную) сразу же добавляют по 1см3дистиллиро
ванной воды и 3 см3ДНС-реактива. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и помещают в
кипящуюводяную баню на 5мин (сточностью, определяемой посекундомеру), послечего охлаждаютдо
комнатной температуры.
Оптическиеплотности измеряют вопытных иконтрольной пробах на ФЭК или СФ при длине волны
540 нм в кюветах с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм против контрольной пробы на реактивы
по 4.3.7.
4.4.5 При определении восстанавливающих сахаров по методу с калием железосинеродистым
после проведения гидролиза издвух пробирок(опытные пробы) отбирают по2см3реакционной смеси в
чистые пробирки. В третью пробирку(контрольную)вносят 2см3основногораствора препаратафермен
та. перемешивают и сразуже отбирают 2см3смеси вчистую пробирку.
Вовсе три пробиркидобавляютпо6 см3 раствора калия гексацианоферрата. Пробирки закрывают
пробками икипятятв водяной бане ровно 10мин(посекундомеру), послечего быстроохлаждаютдо ком
натной температуры.
Измеряют оптическую плотностьсодержимого всехтрехпробирокпротивдистиллированной воды
при длине волны 400—420 нм в кювете столщиной поглощающего светслоя 10 мм.
Показателиоптическихплотностей вопытныхиконтрольной пробахдолжны соответствоватьзна
чениям от 0,50до0.65 ед. ОП. В случае, если ОП опытныхпробменьше0.50. то основнойраствордопол
нительно разводят, если больше 0,65 — берут меньшее разведениеосновного раствора. Обыкновенно
опытные пробы в сравнении с контрольной имеют в 10 раз большее разведение.
4.5 Обработка результатов
4.5.1 Молярную концентрацию глюкозы (в мкмоль/см3)в опытных и контрольном растворахопре
деляют по градуировочному графику.
4.5.2 Целлюлолитическую активность ЦлА, ед/г, в ферментном препарате при определении с
ДНС-реактивом вычисляют по формуле
Ц лА*С°~С\
< 1 >
tc
где С0— молярнаяконцентрацияглюкозы вопытнойпробев соответствиисградуировочным графиком.
мкмоль/см3;
С, — молярная концентрация глюкозы в контрольной пробе в соответствии с градуировочным гра
фиком, мкмоль/см3;
t
— продолжительность гидролиза, ч (1 ч):
* В зависимости от предполагаемой активности.
6