ГОСТ Р 53046—2008
Т а б л и ц а 2
Объем стандартного раствора с молярной
(массовой) концентрацией глюкозы 1
мкмоль/см3 (180 мкг/см3), см’3
Объем буферного
раствора, см3
Концентрация глюкозы в разведении
массовая, мкг/см3молярная, мкмолы’см3
28360.20
37540.30
46720.40
55900.50
6
4
1080.60
731260.70
821440.80
4.3.7 Стандартныерастворы глюкозы готовятвденьпостроения градуировочногографика из трех
параллельных навесок.
4.3.8 Для построения градуировочного графика с реактивомДНС в пробирки вносятпо 1см3стан
дартного раствораглюкозы, приготовленныхло4.3.5. различнойконцентрации. 1см3дистиллированной
воды. 3см3реактива ДНС и быстро перемешивают. Одновременно готовят контрольную пробу на реак
тивы. Для этого к 1см3дистиллированной воды добавляют 1см3ацететного буферного раствора и3 см3
реактиваДНС.
Пробирки помещают в кипящую водяную баню икипятят втечение 5минс точностью, измеряемой
по секундомеру. Пробирки охлаждают до комнатной температуры и измеряют оптическую плотность
растворовна ФЭКили СФпри длине волны 540 нм вкюветахстолщиной поглощающегосветслоя 10мм,
против контрольной пробы на реактивы.
По полученным данным строят градуировочный график оптической плотности (поглощения) как
функцииот концентрации глюкозы (мкмоль/см3). По оси абсцисс откладывают молярные концентрации
глюкозы мкмоль/см3, по оси ординат — оптические плотности в единицах ОП. Рабочая зона градуиро
вочного графика лежит в пределахоптической плотности от0.15 до 0.65 ед. ОП.
Для построения каждой точки градуировочного графика вычисляют средне- арифметическое зна
чение оптической плотности трех параллельных измерений.
Градуировочный график строят для каждой новой партии реактива ДНС. а также при замене при
бора.
4.3.9 Для построения градуировочного графика с железосинеродистым калием вносят в серию
пробирок по 2см3 разведений стандартного раствора глюкозы, приготовленных по 4.3.6. идобавляют 6
см3раствора гексацианоферрата калия. Пробирки помещают в кипящую водяную баню на 10мин. затем
вынимаюти охлаждаютдо комнатнойтемпературы. Измеряютоптическую плотностьокрашенныхраст
воров при длине волны 400—440 нм и толщине поглощающего слоя 10 мм против дистиллированной
воды.
На основании полученных результатов строят градуировочный график зависимости значений
оптической плотности от концентрации глюкозы (мкмоль/ см3). По оси абсцисс откладывают молярные
концентрации глюкозы мкмоль/ см3, по оси ординат — оптические плотности в единицах ОП. График
имеетобратную линейную зависимость. Рабочаязонаградуировочногографикалежитвпределахот0.3
до 0.6 мкмоль/см3 глюкозы, что соответствует поглощению в единицах оптической плотности от 0.50до
0,65 ед. ОП.
Для построения каждой точки градуировочного графика вычисляют среднее арифметическое зна
чение оптической плотноститрех параллельных измерений.
Градуировочный график строятдля каждой новой партии реактивов, а также при замене прибора.
4.3.10 Дляприготовленияраствораферментногопрепаратаотбираютобразец поГОСТ20264.0.
Анализируемые образцы в форме порошка или микрокапсулированные можно использовать без
предварительной подготовки. Анализируемыеобразцы вформе гранул следуетизмельчать (например,
в механической мельнице или фарфоровой ступке) и просеивать через сито с диаметром отверстий не
более 1мм.
5