ГОСТ Р 53046—2008
ному графику, построенному для глюкозы. Диапазон измерений контролируемого показателя
50—500 ед. КМЦлА.
5.2Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы
5.2.1 Для определения ферментативной активности целлюлазы с использованием субстрата
Na-КМЦ применяютсредства измерений, вспомогательноеоборудование и реактивы, которые указаны
в4.2.1—4.2.3. заисключениемхроматографическойбумаги, вместокоторойприменяют Na-КМЦ(содер
жание основного вещества не менее 96 %).
5.2.2 Допускается применение других средств измерений и вспомогательного оборудования с
метрологическимиитехническимихарактеристиками, а такжереактивовпокачествуно нижеуказанных.
5.3Подготовка канализу
5.3.1 Приготовлениеацетатного буферного растворасмолярнойконцентрацией0,1 моль/дм3при
pH 4.7,осуществляют в соответствии с 4.3.1.
5.3.2 Приготовление раствора натрия гидроокиси с массовой долей 10.7 % осуществляют в соот
ветствии с4.3.2.
5.3.3 Приготовление реактиваДНС с массовойдолей 1.0 % осуществляют в соответствии с4.3.3.
5.3.4 Приготовление стандартного раствора глюкозы с молярной (массовой) концентрацией
5 мкмоль/см3(900 мкг/см3) и серии разведений стандартного раствора осуществляют в соответствии
с 4.3.5.
5.3.5 Градуировочный график соответствия концентраций глюкозы оптическим плотностям в
реакции сДНС-реактивом строят, как указано в4.3.7.
5.3.6 Для приготовления субстрата, раствора Na-КМЦ массовой долей 1 %, в коническую колбу
вместимостью 100 см3наливаютоколо70см3буферного раствора, помещаютее на магнитную мешалку и
при включенной мешалке вносят 1.0 г Na-КМЦ. Перемешивание продолжают не менее 40 минут при
комнатной температуредо получения однородного коллоидного раствора. Далее субстрат переносят в
мерную колбу вместимостью 100 см3идоводятобъемдо метки буферным раствором.
Субстрат готовят вдень проведения анализа.
5.3.7 Приготовление основного и рабочего растворов ферментного препарата осуществляют в
соответствии с4.3.9.
5.4 Проведение анализа
5.4.1 Анализ проводят вдвух параллельныхопределениях.
5.4.2 В три пробирки (две опытные и одну контрольную) вносят по 1см3 субстрата, закрывают их
пробками и термостатируют при (50 ± 1)°С в течение 5 минут.
5.4.3 Вдве опытные пробирки вносятпо 1см3 рабочего раствора ферментного препарата. Содер
жимое пробироктщательно перемешивают.
5.4.4 Все три пробирки выдерживают при температуре (50 i 1) °Св течение 10 минут(с точностью,
определяемой по секундомеру).
5.4.5 После проведения гидролиза в две опытные пробирки вносят по 3 см3 реактива ДНС.
В третью пробирку (контрольную) добавляют 3см3реактива ДНС и 1см3рабочего раствора препарата.
Смеси тщательно перемешивают и помещают в кипящую водяную баню на 5 мин (сточностью, опреде
ляемой по секундомеру), послечего охлаждаютдо комнатной температуры.
5.4.6 Измеряютоптические плотностиопытныхи контрольной пробна ФЭК илиСФ при длине вол
ны 540 нм в кюветахстолщиной поглощающегосветслоя 10 мм против контрольной пробы на реактивы
по4.3.7.
5.4.7 Если значенияоптических плотностей опытных проб находятся за пределами рабочей зоны
градуировочного графика, то определение активности повторяют с раствором, имеющим большее или
меньшеесодержание фермента.
5.5 Обработка результатов
5.5.1 Молярную концентрацию глюкозы (в мкмоль/см3)в опытных и контрольном растворахопре
деляют по градуировочному графику.
5.5.2 Целлюлолитическую активность КМЦлА. ед/r. в ферментном препарате вычисляют по фор
муле
КМЦлА = С° ~С’ ,<6>
tc
где С0— молярная концентрация глюкозы вопытной пробе, найденная по градуировочному графику.
мкмоль/см3;
С, — молярнаяконцентрацияглюкозы в контрольнойпробе, найденная по градуировочному графи
ку, мкмоль/см3;
8