ГОСТ 30705-2000
1
5.1 Подготовка посуды
5.1.1 Вымытую посуду стерилизуют в сушильном шкафу при (160±5) "С в течение 2 ч или в
автоклаве при (121±1) “С в течение (30±2) мин с последующим подсушиванием в сушильном шкафу в
течение I ч.
5.1.2 Чашки Петри и пипетки заворачивают в пергамент. В верхнюю часть пипетки предвари
тельно вкладывают кусочек ваты. Стерилизуют при (121±1) ‘С в течение (30±2) мин с последующим
подсушиванием в сушильном шкафу при (160+5) ’С в течение 1ч.
5.1.3 Пробирки и колбы со средой закрывают ватно-марлевыми пробками. 11оверх пробок колб
надевают бумажный колпачок, который обвязывают вокруг горлышка ниткой, резинкой и т. п.
5.1.4 Стерильную посуду хранят в плотно закрывающихся шкафах или ящиках с крышками.
Срок хранения стерильной посуды —не более 30 суг.
5.1.5 Контроль посуды на стерильность проводится аналогично контролю сред согласно 5.2.9.
5.2Подготовка питательных сред и реактивов
5.2.1 Приготовление водного раствора гидроокиси натрия молярной концентрации c(NaOH)=
= 1 моль/дм5
(40,0±0,4) г пироокиси натрия (NaOH) растворяют в объеме от 500 до 7(H) см*дистиллирован
ной волы в фарфором стакане вместимостью 1000 см1, перемешивают, охлаждают до (20+5) “С,
переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см5, доводят объем до метки той же водой.
5.2.2 Приготовление буферного раствора фосфорнокислого калия массовой концентрации
34 мг/см5
(34.0±0.4) г однозамешснного фосфорнокислого калия (КН,Р04) растворяют в объеме от 500
до 700 см5дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 1000 см5, перемешивают и уста
навливают активную кислотность (7,2±0.1) pH добавлением раствора гидроокиси натрия, приготов
ленного по 5.2.1. доводят дистиллированной водой до метки и вновь перемешивают.
Хранят в емкости, укупоренной резиновой пробкой в холодильнике не более 30 cvr при
(6±2)*С.
5.2.3 Приготовление растворов для разведений продуктов
5.2.3.1 Приготовление буферного раствора фосфорнокислого калия массовой концентрации
0,0425 мг/см5
1,25 см5буферного раствора, приготовленного по 5.2.2. вносят в мерную колбу вместимостью
1000 см3,доводятобъем до метки дистиллированной водой, перемешивают, устанавливают активную
кислотность раствора от 7.0 до 7,2 pH добавлением раствора гидроокиси натрия,
разливают в пробирки по 10 см5и колбы по 93 см5и стерилизуют при (121±1) ‘С в течение
(20±2) мин. Раствор используют в день приготовления.
5.2.3.2 Пептонную воду и пептонно-солевой раствор готовят по ГОСТ 26669.
5.2.4 Приготовление водного раствора двууглекислого натрия массовой концентрации
0.1 г/см3
(10,0±0.4) г двууглекислого натрия (Na2CO,) растворяют в дистиллированной воде в мерной
колбе вместимостью 100 см5. Раствор разливают в пробирки от 10 до 20 см5в каждую и стерилизуют
при (121±1) “С в течение (15±2) мин.
5.2.5 Приготовление мясо-пептонного бульона
Говяжье мясо, освобожденное от жира и сухожилий, пропускают через мясорубку, взвешивают,
складывают в кастрюлю, смешивают с питьевой водой в соотношении 1:2 (по массе) и выдерживают
при (6±2) ‘С от 12 до 24 ч. Для ускорения процессов экстракции питательных веществ из мяса
содержимое кастрюли после смешивания с водой подогревают при 50 *Свтечение 1ч. затем кипятят
в течение (30±2) мин. Бульон в горячем состоянии фильтруют через двойной бумажный или ватно
марлевый ф шьтр. Фильтрат доводят питьевой водой до первоначального объема, доба&тяют к нему 1
% пептона и 0,5 % (по массе) хлористого натрия. Устанавливают активную кислотность от 7,2 до 7.4
pH добавлением раствора гидроокиси натрия, разливают в колбы и стерилизуют при (121±1>“С в
течение (20±2) мин.
5.2.6 Приготовление мясо-пептонного агара массовой концентрации 15 г/дм3
(15,0±0.4) г мелко нарезанного и промытого агара в волокнах или порошке добавляют к 1дм5
мясо-пептонного бульона, приготоатенного по 5.2.5 и оставляют для набухания от 10 до 15 мин.
Затем смесь кипятят при постоянном помешивании до полного растворения агара, устанавливают
активную кислотность (7,3±0.1) pH добавлением раствора гидроокиси натрия, сразу же
фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают в колбы, закрывают ватными пробками и
стерилизуют при (121±1) *С н течение (15±2) мин.
5.2.7 Приготовление среды из сухого питательного агара
(35,0±0.4) г сухого питательного агара (на основе килечного пиролизата), (2,50±О.О4) г экстра-
4