ГОСТ Р 52832—2007
8.1 Подготовка образцов
8.1.1 Молоко
pH пробы молока объемом 100 см2доводятсоляной кислотой (см. 5.3)до 3,8.
8.1.2 Продукты на основе молока
Суспензируют 20 г образца и 5 г обезжиренного сухого молока (см. 5.6) в 50 см3воды. pH пробы
доводят соляной кислотой (см. 5.3)до 3,8.
Добавление обезжиренногосухого молока неявляетсяобязательнымдля всехпродуктов наосно
ве молока. При исследовании, например, сухого обезжиренного молока, цельного сухого молока или
казенное его можноне добавлять. Добавление обязательно в случаесухой сыворотки, йогурта, фрукто
вого йогурта ифруктового мороженого. Дляостальныхпродуктовнаоснове молокадобавление обезжи
ренного сухого молока также рекомендуется.
Для испытаниясыра можно использовать альтернативную процедуру. Суспензируют с помощью
блендера 20 г сыра в 100 см3теплой (45 °С) воды. После смешивания pH пробыдоводят соляной кисло
той (6 моль/л) до 4.5. Суспензию переносятв плоскодонную колбуобъемом 750 см3.Добавляют водыдо
конечного объема в 12.5 раз большего массы сыра. Суспензию встряхивают в течение ночи (16 ч) на
водяной бане при температуре (25 ± 1) °С. Снова доводят pH до 4.5. Суспензию центрифугируют и
фильтруют. Отбирают 100 см3фильтрата и проводятиспытание согласно 8.1.3.
Если сухоеобезжиренное молоконедобавляется, суспензируют20гв40 см3воды. pH пробыдово
дят соляной кислотой (см. 5.3)до 3.8.
8.1.3 Общий ход испытания
8.1.3.1 Центрифугируют (см. 6.3) пробу с частотой вращения от 27000 мин*1до 34000 мин*1при
5 ®Св течение 20 мин.
8.1.3.2 Супернатант декантируют. Добавляют 0.05 см3 холодной трихлорацетоуксусной кислоты
(см. 5.5) на 1см3 пробы и смешивают.
8.1.3.3 Центрифугируют с частотой вращения от 27000 мин-1до 34000 мин-’ при 5 °С в течение
20 мин.
8.1.3.4 Осадокрастворяютв 1см3трис-буфера (см. 5.2.1). pHдоводятдо 8.5 спомощью гидрооки
си натрия(см. 5.4). Раствор разводят трис-буфером до 2 см3,перемешивают.
8.1.3.5 Раствор прогревают в кипящей водной бане (см. 6.2) втечение 15 мин.
8.2 Приготовление тест-культуры (положительный контроль)
8.2.1 Тест-культуру (см. 5.8)засевают вбульон BHI (см. 5.7). Инкубируют 24ч при (371 1)вС. Цен
трифугируют(см. 6.4)счастотой вращения от 2800 мин-’ до 3500 мин-* в течение 15 мин. Надосадочную
жидкостьдекантируют.
8.2.2 Супернатант прогревают на кипящей водяной бане (см. 6.2) в течение 15 мин. Прогретый
супернатант может храниться при температуре 5 °С не болеечетырех недель.
При необходимости любой штамм Staphylococcus aureus (например, выделенный из молока или
продуктов на основе молока) может быть исследован на наличие термонуклеазы методом, приведен
ным выше для тест-культуры.
8.3 Приготовление толуидинового синего О-ДНК агара
Цилиндрическим пробойником (см. 6.5)вагаре (см. 5.2.5) прорезают двелунки. Агар поверхностью
вниз подсушивают в термостате (см. 6.1) со снятой крышкой и в течение 60 мин при температуре
(37 ♦.1) °С.
При испытании нескольких образцов в одном агаре прорезаютдо 10 лунок.
8.4 Определение термонуклеазы
8.4.1 В однуизлуноквносят 10мм3положительного контроля (см. 8.2.2). в остальные — по 10мм5
проб (см. 8.1.3.5).
8.4.2 Чашки Петри с крышками сверху инкубируют (см. 6.1) 4 ч при температуре (37
1
1) °С. При
отрицательном результатечашки инкубируютдо 24 ч.
9 Обработка результатов
Розовое гало (ореол или зона свечения) диаметром более 1 мм вокруг лунки свидетельствует о
наличиитермонуклеазы (необходимо сравнитьс положительным контролем). Гало любого иного цвета,
кроме розового, не считается признаком термонуклеазной активности.
Положительный тест на термонуклеазу указывает на рост коагулазоположительных стафилокок
ков в количестведо 10ЕКОЕ/r и более, чтоприводит к образованию энтеротоксина.
4