ГОСТ Р 52832—2007
5Подготовка к испытанию
5.1 Основные материалы
Для текущей лабораторной практики см. ГОСТР 53430.
Используют реактивы только аналитического качества, если неоговорено иначе, и толькодистил
лированную или деминерализованную воду, или воду аналогичной чистоты.
Если приготовленные среды и реактивы неиспользуютнемедленно, их хранят, если не оговорено
иначе, в защищенном от светаместе при температуреот0 °Сдо 5 °С не более 1мес в условиях, пред
отвращающихлюбые изменения в их составе.
5.2 Толуидиновый синий О-ДНКагар
5.2.1 Трис-буфор
5.2.1.1 Состав:
трис(гидроксиметил)аминометан (С4Н,,N03) — 6.06 г:
хлорид кальция (СаС12) — 0,11 г;
вода — 1000 см3.
5.2.1.2 Приготовление
Растворяюттрис(гидроксиметил )аминометан ихлоридкальция в 980см3воды.Доводят pHдо 9.0и
водудо 1000 см3.
5.2.2 Основа среды
5.2.2.1 Состав.
дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) — 0,3 г.
хлорид натрия (NaCI) — 10,0 г ;
агар— Ю.Ог:
трис-буфер(см. 5.2.1)— 1000 см3.
5.2.2.2 Приготовление
Компоненты нагреваютнаводянойбане(см. 6.2) до полногорастворенияДНКи агара(около 1,5 ч).
5.2.3 Раствор толуидинового синего О
5.2.3.1 Состав:
толуидиновый синий О (C15H16N3SCI) — 0,31 г;
вода — 10см3.
5.2.3.2 Приготовление
Толуидиновый синий О растворяют в воде при слабом нагревании и фильтруют через марлю (см.
6
.
12
).
5.2.4 Полная среда
5.2.4.1 Состав:
основа среды (см. 5.2.2) — 1000 см3:
раствор толуидинового синего О (см. 5.2.3) — 3 см3.
5.2.4.2 Приготовление
Основу среды охлаждают до (50 ± 1) °С, добавляют профильтрованный раствор толуидинового
синегоО иперемешивают.
Полная среда может храниться маленькими порциями в закупоренных колбах или бутылях
несколько месяцев в защищенном от светаместе при температуреот0 °Сдо 5 °С.
5.2.5 Приготовление чашек со средой
В чашки Петри (см. 6.8) вносят по 13см3свежей полной среды (см. 5.2.4) или хранившейся среды,
предварительно расплавленной при (50i 1)°С. Дают агару застыть.
Приготовленные среды могут храниться не болов 2 мес (дном кверху и защищенными от высыха
ния) в защищенном от света месте при температуре от 0 °Сдо 5 °С.
5.3 Соляная кислота. с(НС1) =2 моль/дм3
5.4 Гидроокись натрия, с (NaOH) * 2 моль/дм3
5.5 Трихлоруксусная кислота, с (СС13СООН) =3 моль/дм3.
Растворяют49,02 гтрихлоруксусной кислоты в 100 см3воды.
5.6 Обезжиренное сухое молоко
Обезжиренное сухое молоко должно быть свободно от термоиуклеаэы. Наличие термонуклеазы
проверяют вкаждой новой партии, используя метод, приведенный в настоящем стандарте.
2