ГОСТ Р 52830—2007
9.2.2Инокуляция и инкубация селективного обогатительного бульона (бульона с лаурил-
сульфатом)
9.2.2.1 Подготавливают ряд последовательных разведений, по три пробирки на каждое разведе
ние. Для пробживых моллюсков и некоторыхдругих особых продуктов, а также для получения большей
точности результатов необходимо использовать по пять пробирок на каждое разведение (см. приложе
ниеА).
3.2.2.2 Беруттрипробирки сселективной обогатительнойсредойдвойной концентрации (см. таб
лицу 1 а)] и. используя стерильную пипетку(см. 6.7), в каждую пробирку вносят по 10см3первичногораз
ведения. Таким образом, каждая пробирка этого рядабудетсодержать по 1гобразца.
9.2.2.3 Берут три пробирки с селективной обогатительной средой одинарной концентрации
[см. таблицу 1Ь)]и. используя новую стерильную пипетку (см. 6.7). в каждую пробирку вносят по 1см3
первичного разведения. Таким образом, каждая пробирка этого ряда будет содержать по 0,1 г об
разца.
9.2.2.4 Для каждогопоследующегоразведения (соответствующего0.01 г.0,001 г ит.д. продукта на
пробирку) повторяютпроцедуру, как в 9.2.2.3, используядля каждого разведения новую пипетку. Иноку
лят исреду тщательно перемешивают.
9.2.2.5 Инокулироеанныесреды слаурилсульфатомдвойнойпо9.2.2.1 или одинарнойконцентра
ции по 9.2.2.3 и 9.2.2.4 инкубируют в термостате (см. 6.2) при температура 37 °С в течение (24 1 2) ч.
Если на этой стадии не обнаруживают ни газообразования, ни замутмения среды, затрудняющего опре
деление газообразования, продолжают инкубациюдо (48
i
2)ч.
П р и м е ч а н и е — Время инкубации проб живых моллюсков должно составлять (48 г 2) ч.
При исследовании некоторых молочных продуктов (например, казеина) пробирки-поплавки Даре
ма могут застревать надне пробирки сселективной обогатительной средой. Если после 48 ч инкубации
в пробирке обнаруживается лишь помутнение без газообразования, то также осуществляют пересев в
EC-бульон согласно 9.2.3.
9.2.3 Инокуляция и инкубация селективной среды (ЕС-бульона)
9.2.3.1 При обнаружении помутнения, выпадения осадка или видимого газообразования после
инкубацииселективнойсредыдвойнойконцентрации[см. таблицу 1а)] согласно 9.2.2.5 или приобнару
жении видимого газообразования после инкубации селективной среды одинарной концентрации
(см. таблицу 1Ь)] согласно Э.2.2.5 с помощью бактериологической петли (см. 6.5) проводят пересев в
пробиркус EC-бульоном (см. 5.3).
9.2.3.2 Инокулированный согласно 9.2.3.1 EC-бульон инкубируют на водяной бане (см. 6.3) или в
термостате (см. 6.2) (24 ± 2) ч при температуре 44 °С. Если на этой стадии не обнаруживают видимого
газообразования в EC-бульоне(см. 5.3), то общее время инкубации продлеваютдо (48 ± 2)ч.
П р и м е ч а н и е — Общее время инкубации проб живых молпюсков должно составлять (24 ± 2) ч.
9.2.4 Инокуляция и инкубация пептонной воды
При обнаружении видимого газообразования после инкубации согласно 9.2.3.2 с помощью бакте
риологической петли (см. 6.5)производятпересев впробиркуспептоннойводой(см.5.4). предваритель
но прогретой до температуры 44 °С. Инкубируют (48 ± 2)ч притемпературе 44 °С.
9.2.5 Обнаружение образования индола
В пробиркус пептонной водой (см. 5.4) послеинкубациисогласно9.2.4добавляют0.5см3реактива
на индол (см. 5.5). После интенсивного перемешивания через 1 мин проводят оценку реакции. Красное
окрашивание в спиртовой фазе свидетельствуето наличии индола.
9.2.6 Оценка результатов
При обнаружении видимого газообразования в пробирке с EC-бульоном и образования индола в
пробиркес пептонной водой (см. 9.2.2—9.2.4) селективную обогатительную среду оценивают как поло
жительную (презумптивная Escherichia coliобнаружена).
Для каждого разведения определяют число положительных результатовдля среды двойной кон
центрации [см. таблицу 1 а)] иодинарной концентрации [см. таблицу 1Ь)].
6