С. 10 ГОСТ 20909.2-75
В три пробирки, содержащие 5—7 мл среды Булира, «ысевают
по 1 мл из одного разведения или из различных разведений спер
мы (1:10, 1: 100, 1: 1000). Сперму разводят 0,9%-ным стериль
ным раствором хлористого натра. Если н пробе необходимо опре
делить колн-тшрн общее количество бактерии, то высев можно
производить одновременно одной пипеткой.
Пробирки с посевом выдерживают в термостате при темпера
туре 43—44®С в течение 18—24 ч. В результате осмотра пробирок
устанавливают бродильный титр.
4.2.3. Приотсутствии помутнения среды и газообразования
реакцию считают отрицательной. При изменении цвета среды (по
желтение, помутнение) и газообразовании (пузырек в газовке)»
что указывает на размножение в среде микробов из группы ки
шечной палочки, реакцию считают положительной.
При наличии положительной реакции на бродильный титр про
водят исследование на идентификацию кишечной палочки. Для
этого из пробирок с измененным цветом среды и газообразовани
ем производят посев на среду Эндо с таким расчетом, чтобы полу
чить отдельные колонии!
Перед посевом дно чашки со средой Эндо делят на четыре сек
тора. Из каждой пробирки петлей высевают минимальное коли
чество материала на отдельный сектор. Чашки с посевами крыш
ками вниз помещают в термостат при температуре 37,5±0,5°С на
18-24 ч.
При отсутствии роста на среде Эндо колоиий, типичных для
бактерий группы кишечной палочки, сперму считают не загряз
ненной микроорганизмами этого вида.
При появлении на среде Эндо колоний, типичных для бакте
рий группы кишечной палочки (красных, нередко с металличе
ским блеском, розовых,-бледно-розовых), а также бесцветных ко
лоний, проводят их изучение.
4.2.4. Окраска препаратов
Из изолированных колоний, характерных для бактерий группы
кишечной палочки, приготавливают препараты, которые окраши
вают или по методу Грама, или по методу Грама в модификации.
Калины и мнкроскопируют.
4.2.4.1. Окраска по методу Грама
На мазок культуры, фиксированной на огне, накладывают ку
сочек фильтровальной бумаги, наливают реактив 1 (см. п. 3.2.6) я
выдерживают 1—2 мин. Краску сливают, бумагу снимают и, не
промывая препарата водой,наливаютраствор Люголя (реак
тив 2). Выдерживают 1—2 мин до почернения препарата. Слива ют
раствор Люголя и прополаскивают препарат в 96%-ном спирте в
течение 0,5—1 мин, пока не перестанет отходить краситель.
Промывают тщательно водопроводной водой. Дополнительно ок-
13