ГО СТ 26073— 84 Ctp. 9
Свежедефебринированную кровь или кровь через 6—14 сут
послеее консервированиядва-три разаотмывают в течение
15 мин на центрифуге с частотой вращения 2000—3000 об/мин в
физиологическом растворе до полного обесцвечивания надосадоч-
иой жидкости. Для постановки реакции готовят нз осадка взвесь
эритроцитов в физиологическом растворе.
4.2.2.Д
ля
приготовления гемолитической системы, применяе
мой в РСК, смешивают равные объемы гемолитической сыворот
ки в удвоенном титре, указанном учреждением, ее изготовившим,
и взвеси эритроцитов. Смесь оставляют на 15 мин для сенсиби
лизации.
4.3. Проведение исследования
4.3.1.Реакциюсвязываниякомплемента (РСК) проводят з
пробирках вместимостью 2,5 см3 по 0,5 см3 каждого компонен
та—сыворотки (испытуемой н контрольных), антигена, компле
мента и 1 см3 гемолитической системы.
Предварительно испытуемую сыворотку, сыворотки отрица
тельную и положительную (контроли) разбавляют физиологичес
ким раствором 1:10, инактивируют о водяной бане при темпера
туре 61—62°С в течение 30 мин.
Реакцию связывания комплемента проводят в водяной бане
притемпературе 37—38°С.Времясвязываниякомплемента
20 мин, время реакции после добавления гемолитической систе мы
-- 20 мин.
В качестве контроля вместо испытуемой сыворотки в РСК ис
пользуют отрицательную, а также положительную паратуберку
лезные сыворотки в разведениях 1:10 с антигеном и 1:10 без
антигена.
Контролем гемолитической системы является 1,5 см3 физноло-
гического раствора и 1 см3 гемолитической системы.
При постановке опыта проводят титрование комплемента в
соответствии с ГОСТ 16448—78. В РСК берут комплемент в ко
личестве на два интервала
выше его
титра (при титре 0,16—0,22;
пентмтре 0,22—0.28).
Титры каждой серин антигенаи гемолитической сызоротки
устанавливают предприятия-изготовители.
Реакцию связывания комплемента учитывают визуально один
рац через 16—18 ч выдерживания в прохладном месте.
4.4. Обработка результатов
Результаты реакции учитывают по следующей схеме:
+ 4-4-4- (4 креста) — отсутствие гемолиза, надосадочная жид
кость прозрачная и бесцветная;
+ + + (3 креста)— 25% гемолиза эритроцитов;
+ + (2 креста)— 50% гемолиза эритроцитов;
+ (1 крест)— 75% гемолиза эритроцитов;