С. 5 ГОСТ 10444.8-88
4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ
1
4.1. Выделение характерных колоний
4.1.1. Для проведения испытания отбирают объем 0,1—0,2 см5подготовленной пробы продукта,
его разведения или разведения культуральной жидкости.
Допускается для получения раздельных колоний проводить посев культуральной жидкости пет
лей на поверхность питательной среды.
4.1.2. Подготовленную пробу продукта, его разведения или разведения культуральной жидкости
высевают поверхностным методом по ГОС Т26670 параллельно в две чашки Петри с предварительно
подсушенной селективной средой, указанной в пп. 3.2.1-3.2.3 или 3.2.4.
4.1.3. Посевы на чашках Петри термостатируют при (30±1) ’С в течение 24-48 ч. Через 24 ч
посевы просматривают и выбирают чашки Петри, на которых выросло от 15 до 150 колоний, харак
терных для В. cereus. Характеристика колоний В. сеreus на селективных питательных средах приведена в
приложении.
Через 48 ч уточняют число обнаруженных колоний. Корректировку подсчета количества
В. cereus проводят после изучения морфологических и биохимических особенностей микроорганизмов
из колоний, характерных для В. cereus.
4.2. Подтверждение принадлежности характерных колоний к В. cercus.
4.2.1. Язя подтверждения принадлежности подсчитанных колоний к колониям, образуемым В.
cereus, микроорганизмы из пяти колоний пересевают на скошенный мясо-пептонный агар и термоста
тируют 18-24 ч при (30±1) ’С.
На скошенном мясо-пептонном агаре В. cereus образует сплошной налет белого цвета, иногда с
мучнистой поверхностью. Со скошенного мясо-пептониого агара готовят препараты, окрашивают по
Граму по ГОСТ 30425, а также определяют подвижность клеток при микроскопированнн методом
висячей капли.
В мазках, приготовленных со скошенного агара, В. cereus имеет вид крупных грамположительных
палочек размером 1,0-1 .2 x 3 ,0 - 5,0 мкм со слегка закругленными концами, лежащих в виде цепочек
или штакетообразных скоплений, реже отдельно друг от друга. В. cereus образует субтерминальные или
центральные споры. В висячей капле клетки подвижны, однако могут встречаться штаммы со слабо
выраженной подвижностью.
4.2.2. Язя доказательства анаэробной ферментации глюкозы культуры со скошенного агара, ука
занного в п. 4.2.1, высевают уколом в питательную среду с индикатором бромкрезоловым пурпуровым и
глюкозой (см. п. 3.2.6). Посевы инкубируют при температуре (30±1)*С в течение 24 ч. В. cereus
растет, окрашивая среду в желтый или желто-коричневый цвет по всей длине укола.
4.2.3. Язя определения способности В. cereus ферментировать маннит культуры со скошенного
агара (см. п. 4.2.1) пересевают на питательную среду с индикатором бромкрезоловым пурпуровым и
маннитом (см. п. 3.2.7). Посевы термостатируют при (30± 1) “С в течение 24 ч.
При развитии В. cereus на среде с маннитом, цвет среды не изменяется.
4.2.4. Я я постановки реакции на образование аиетилметилкарбинола культуры со скошенного
агара (см. п. 4.2.1) пересевают на пептонную среду с глюкозой с pH 7.0. Посевы термостатируют при
(30±1) *С в течение 24 ч. В чистую пробирку отбирают 1 см’ культуры, добавляют 0.2 см1раствора
пироокиси калия массовой концентрацией 400 г/дм3и 0.6 см’ свежеприготовленного по ГОСТ 10444.1
раствора I-нафтола и несколько кристаллов креатина. Допускается реакцию на образование ацетилме-
тилкарбинола проводить без применения креатина.
Посте добавления каждого раствора содержимое пробирки тщательно встряхивают, а затем
оставляют на I ч при комнатной температуре.
В. cereus образует ацетил метил карбинол, поэтому окраска среды меняется в розовый цвет.
При отрицательной реакции культуральную жидкостьтермостатируютдополнительно 24 ч. после
чего делают окончательное заключение.
4.2.5. При постановке реакции на подтверждение редукции В. cereus нитратов предварительно
убеждаются в том. что сама среда не содержит нитритов. Язя этого в две контрольные пробирки со
средой добавляют по 0,2—0,5 см3смеси равных объемов растворов, как указано в пп. 3.1.4. 3.1.5. Если в
течение 15 мин не происходит покраснения среды, то среду используют для определения ннтратреду-
цирующей способности микроорганизмов.
Допускается использование йодокрахмального реактива по ГОСТ 10444.1 для контроля отсут
ствия нитритов в питательной среде.
270