ГОСТ Р 51259-99
8.5.1.2 Измеряют оптическую плотность — Аи раствора относительно оптической плотности
воздуха.
8.5.1.3 В кюветудобавляют 0,02см* суспензии ГД Г. Содержимое кюветы перемешивают пластико
вым шпателем или стеклянной палочкой и остаазяют на 30 мин при комнатной температуре.
8.5.1.4 Измеряют оптическую плотность —Лч раствора относительно оптической плотности воз
духа.
8.5.2 Определениесвободной галактозы
Определение можно не проводить, если свободная галактоза отсутствует в пробе.
8.5.2.1 Во вторую кювету спектрофотометра (фотометра) последовательно дозируют 0,20 см1
раствора НАД в нитратном буфере. 0.1см’ прозрачного фильтрата по 8.4, 1.00 см’ буферного раствора
дифосфата калия и 1.90см3дистиллированной волы. Содержимое кюветы перемешивают
пластиковым шпателем или стеклянной палочкой и оставляют при комнатной температуре на 15 мин.
8.5.2.2 Измеряют оптическую плотность —Аи растиора относительно оптической плотности воз
духа.
8.5.2.3 В кювету добаатяют 0,02 см ’ суспензии ГДГ. Содержимое кюветы перемешивают пласти
ковым шпателем или стеклянной палочкой и остаатяют на 30 мин при комнатной температуре.
8.5.2.4 Измеряют оптическую плотность —A}t раствора относительно оптической плотности юз-
духа.
8.5.3 Определение лактозы
8.5.3.1 В третью кювету спектрофотометра (фотометра) последовательно дозируют 0,20 см’ ра
створа НАД в нитратном буфере. 0,1 см1прозрачного фильтрата по 8.4 и 0.02 см1 суспензии ГЗ.
Содержимое кюветы перемешивают, осторожно встряхивая, и остаатяют при комнатной температуре
на 15мин. Затем в кювету’ последовательно добаатяют 1.00 см1буферного раствора дифосфата калия и
1,90см1дистиллированной воды. Содержимое кюветы перемешивают пластиковым шпателем или стек
лянной палочкой и остаатяют при комнатной температуре на 2 мин.
8.5.3.2 Измеряют оптическую плотность —Л, _раствора относительно оптической плотности
воздуха.
8.5.3.3 В кюветудобавляют 0,02 см’ суспензии ГДГ. Содержимое кюветы перемешивают пластико
вым шпателем или стеклянной палочкой и оставляют на 15 мин при комнатной температуре.
8.5.3.4 Измеряют оптическую плотность —Л,,., раствора относительно оптической плотности
воздуха.
8.6Измерения оптической плотности растворов по 8.5.2.4 и 8.5.3.4 повторяют через каждые
2 мин до окончания реакции, что выражается в устаноалении постоянной оптической плотности
раствора. Подобные измерения необходимо проводить при использовании ферментных препаратов с
длительным сроком хранения.
9 Выражение результатов
9.1 После измерений оптических плотностей растворов рассчитывают изменения оптических плот
ностей растворов, которые вызваны окислением свободной галактозы АЛ и окислением свободной
галактозы и галактозы, образовавшейся при гидролизе лактозы, АЛЛ1
ДЛ = (А2- А и) - (А1- А иУ,(1)
М ., =
(^,,-A uJ - (A^-AJ.
(2)
Изменение оптической плотности раствора ДЛ . вызванное пиролизом лактозы, рассчитывают
по ({юрмуле
Д
/1
_ = Д
Л
_г
—
Д
А
’.
(
3
)
9.2 Массовую долю W лактозы в пробе, г/100 г, рассчитывают по формуле
е d У
2
т
W, а
А/, и,V,
10
~*
(4)
где А/ —молярная массалактозы (безводная форма), 342,30 г/моль; молярная масса моногидрата лак
тозы, 360.31 г/моль (массовуюдолю моногидрата лактозы в пробе рассчитывают умножением
массовой доли безводной лактозы на коэффициент 1,0588):
4
264