ГОСТ Р 51259-99
4 Сущность метода
Метод определения галактозы основан на окислении галактозы, содержащейся в освобожденном
от жира и белка водном экстракте пробы молока или молочных продуктов, под действием НАД в
присутствии фермента ГДГ и фотометрическом измерении массовой доли образовавшегося НЛДН,
эквивалентной массовой доле галактозы в пробе (свободная галактоза).
Метод определения лактозы основан на пиролизе лактозы, содержащейся в освобожденном от
жира и белка водном экстракте пробы молока или молочных продуктов, в присутствии ГЗ до глюкозы
и галактозы, окислении имеющейся в пробе галактозы (свободная галактоза плюс образовавшаяся при
гидролизе лактозы) под действием НАД в присутствии фермента ГДГ и фотометрическом измерении
массовой доли образовавшегося НЛДН. эквивалентного массовой доле галактозы, и расчете массовой
доли лактозы по разности оптических плотностей данного раствора и раствора, используемого
при определении свободной галактозы.
5 Реактивы
При проведении анализа используют химически чистые или чистые для анализа реактивы.
Вода, используемая для приготовления растворов ферментов, должна быть бидисгиллированной.
Вода, используемая для приготовления растворов химических реагентов и подготовки проб,
должна быть дистиллированной по ГОСТ 6709 или деминерализованной.
Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов для определения
лактозы и галактозы при условии соответствия их качества требованиям настоящего стандарта.
5.1 Раствор сернокислого цинка
30 г сернокислого цинка по ГОСТ 4174 (ZnS04■7Н.О) растворяют в 100 см* дистиллированной
воды. Раствор хранят при комнатной температуре 12 мес.
5.2 Раствор гексациано-(П)-фсррата калия
15 г гексаииано-(М)-феррата калия (KJFe(CN)J ЗН;0) растворяют в 100см1дистиллированной
воды. Раствор хранят при температуре 4 ’С 1мес.
5.3 Гидроокись натрия по ГОСТ4328, раствор молярной концентрации c{Na()H) = ОДЗмаль/дм1.
5.4 Цитратный буферный раствор
2,8 г тринатрийцитрата дигидрата (CbH40,Naj- 2Н.О). 0.625 г сернокислого магния по
ГОСТ 4523 (MgSO, •7Н:0) и 0,042 г моногидрата лимонной кислоты по ГОСТ 3652 (С,НкО,- Н.О)
растворяют в 40 см1дистиллированной воды. Активную кислотность раствора доводят до 6,6 pH не
сколькими каплями раствора серной кислоты по ГОСТ 4204 молярной концентрации c(H,S04)
= = 2 моль/дм5 или раствора гидроокиси натрия по ГОСТ 4328 молярной концентрации c(NaOH) =
= 0,1 моль/дм1. Объем раствора доводятдистиллированной водой до 50см». Буферный раствор устойчив
при температуре 4 "С 3 мес.
5.5 Буферный раствор дифосфата калия
8,3г дифосфата калия по ГОСТ 2493 (К4Р,0,) растворяют в 40 см* дистиллированной воды.
Активную кислотность раствора доводят до 8.6 pH раствором серной кислоты по ГОСТ 4204 молярной
концентрации c<H,S04) = 2моль/дм\ Объем раствора доводят дистиллированной водой до 50 см1.
Буферный раствор устойчив при температуре 4 "С 2 мес.
5.6 Раствор НАД
0,035 г НАД растворяют в 7см1нитратного буфера по 5.4. Раствор устойчив при температуре 4 С
три недели.
5.7 Суспензия фермента ГЗ
Сухой лиофилизат (i-галактозидазы из Е. сой массой 0.005 г и активностью 150 Е суспендируют
в 1см’ раствора аммония сернокислого по ГОСТ 3769 молярной концентрации
c
((NH4),S04) =
= 2,2 моль/дм5. Суспензия устойчива при температуре 4 ‘С 12 мес.
5.8 Суспензия фермента ГДГ
Сухой лиофилизат р-галактозодсгидрогеназы из Pseudomonas tluorescens массой 0,005 г и актив
ностью 25 Е смешивают с 1см5раствора аммония сернокислого по ГОСТ 3769 молярной концентра
ции c((NH4),S04) = 2,2 моль/дм5. Суспензия устойчива при температуре 4 *С 12 мес.
2
262