Для проверки чистоты или для очистки имеющихся культур грибов пользуются
агаровыми пластинками, на которых получают отдельные колонии грибов. Для
получения отдельных колоний микроорганизмов на агаровых пластинках в чашках
Петри наиболее удобным является способ Коха, описанный ниже.
Берут несколько пробирок с расплавленным сусло-агаром. Одну из них
зажимают между большим и указательным пальцами левой руки так, чтобы
пробирки находились почти в горизонтальном положении во избежание
попадания в них зародышей из воздуха. Затем, сняв ватную пробку и зажав ее
между мизинцем и ладонью правой руки так, чтобы часть пробки, бывшая внутри
пробирки, не касалась руки, слегка обжигают края пробирки и вводят внутрь ее
посевной материал с помощью бактериологической петли или иглы. После этого
обжигают горлышко пробирки и, закрыв ее ватной пробкой, осторожно
размешивают расплавленный сусло-агар наклонением пробирки в разные
стороны и раскатыванием ее между ладонями. Затем берут пробирку с
расплавленным сусло-агаром и, соблюдая те же самые предосторожности,
переносят петлей или иглой 2-3 капельки из первой пробирки во вторую.
Получив первое и второе разбавление посевного материала, производят
разлив. Сначала снимают пробку и после обжига края пробирки вливают
содержимое ее в стерильную чашку Петри.
Сусло-агар распределяют равномерным слоем по дну чашки осторожным
наклонением последней в разные стороны так, чтобы не запачкать средой
крышку. Таким же способом выливают содержимое второй пробирки в другую
стерильную чашку Петри и обе чашки Петри выдерживают при температуре 29±2
°С и относительной влажности 95±3%.
Каждая спора, попавшая в сусло-агар из посевного материала, будет при
застывании сусло-агара закреплена на определенном месте, где она начнет
развиваться и даст колонию. Колонии, образовавшиеся из одной клетки, и будут
представлять чистую культуру.
После просмотра колоний под микроскопом и установления однородности
клеток в микроскопических препаратах производят отсев микроорганизмов из
колонии в пробирку на твердую косую питательную среду с соблюдением правил
стерильности.
Пипетки, предметные стекла и прочие лабораторные предметы после
употребления опускают в сосуд с дезинфицирующим раствором. В качестве
дезинфицирующих растворов в лабораторной практике чаще всего употребляют
5%-ный раствор фенола (карболовой кислоты) или 5%-ные раствора крезола и
лизола, а также 10-20%-ную взвесь хлорной извести и другие вещества.
Засеянные питательные среды в пробирках и чашках Петри для выращивания
культурмикроорганизмоввыдерживаютпритемпературе29±2°Си
относительной влажности 95±3% в течение 10 дней до появления зрелых спор
грибов.
Признаками появления созревших спор грибов является окраска колоний.
8. Прокалить иглу или петлю и часть держателя в пламени спиртовки.1. Aspergillus niger (v. Iiegh)- черная.
2. Aspergillus amstelodami (Mong) - ярко-желтая.
3. Penicillium syslopium (Westl)- зеленая.
4. Penicillium brevicompacturn - окраска меняется от белой до розовой,
(Dierckx) лососевой и бурой. В спороносной области
колонии - зеленого цвета.
5. Paecilomyces varioti (Bain)- желтовато-бурая.
6. Stachybotryes atra (Corda)- черная.
7.Chactomiumglobosum- серо-коричневая.
(Kunze)
8.Aspergillumversicoler- сине-зеленая.
(Tierab)
9. Aspergillum flavus (Zink)- серая.
10.Trichodermalignorum- зеленая.
(Harz)
Созревшие споры используются для приготовления водной суспензии.
Г. Хранение культур грибов
Музейные части культуры грибов, представляющие собой потомство одной
клетки, выращивают и хранят на косых питательных средах в пробирках,
закрытых ватными пробками. Пробирки с культурами хранят в холодильнике в
чистом помещении при температуре от 5 до 10 °С или при комнатной температуре
20±5 °С (в затемненном помещении).
Срок хранения культур грибов в условиях температуры от 5 до 10 °С - 3
месяца. Срок хранения культур грибов при температуре 20±5 °С - не более одного
месяца.
После окончания указанного срока хранения культур грибов их следует снова
пересевать на свежую питательную среду.
Ввиду того, что в результате многократных пересевов культуры грибов могут
выродиться, рекомендуется обновлять культуры один раз в три года.
Д. Метод приготовления суспензии спор
Для приготовления водной споровой суспензии используют культуру грибов,
возраст которых равен 14-30 суткам (считая с момента пересева).
В культуру грибов прибавляют 5-7 мл стерильной дистиллированной воды,
которая содержит 0,01% смачивающего агента - лаурилсульфоната натрия или