10
ной к массовой концентрации внутреннего стандарта в градуировочном растворе. Объем содержимого в колбе доводят до метки буферным раствором цитрата лития с 2,0 или 2,2 ед. рН. Полученный раствор используют для хроматографического анализа.
- При испытании соковой продукции с объемной долей мякоти более 10 % пробу массой 10,0 г помещают в мерную колбу вместимостью 50 см3, объем содержимого в колбе доводят до метки дистиллированной водой, содержимое колбы тщательно перемешивают и центрифугируют при факторе разделения не менее 990 g в течение 15 мин. В случае неполного осаждения нерастворимых в дистиллированной воде частиц пробу фильтруют через обеззоленный фильтр по 4.10. Затем подготовленную пробу объемом от 5,0 до 25,0 см3 пипеткой подходящей вместимости переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3. Объем пробы выбирают исходя из ожидаемой массовой концентрации анализируемых компонентов в пробе таким образом, чтобы массовая концентрация каждого из анализируемых компонентов в растворе пробы для хроматографического анализа находилась в границах диапазона линейности аналитического сигнала детектора, но была не менее трехкратной величины предела детектирования, указанного в инструкции по эксплуатации анализатора. В колбу пипеткой вносят основной стандартный раствор В по 6.3.3 (раствор внутреннего стандарта) в объеме, необходимом для получения массовой концентрации внутреннего стандарта в растворе пробы, максимально приближенной к массовой концентрации внутреннего стандарта в градуировочном растворе. Объем содержимого в колбе доводят до метки буферным раствором цитрата лития с 2,0 или 2,2 ед. рН. Полученный раствор используют для хроматографического анализа.
- Проведение хроматографического анализа
- Условия хроматографического анализа
Рабочее давление: 90—125 бар.
Температура колонки программируемая — от 36 °С до 87 °С.
Температура послеколоночного реактора — от 110 °С до 135 °С.
Скорость подачи буферных растворов — 35 см3/ч.
Скорость подачи нингидрина — 25 см3/ч.
Объем вводимой пробы: 10—30 мкл.
Длина волны детектора 570 или 440 нм (для аминокислот, аналогичных пролину).
Элюирование проводят с 5—6 буферными растворами с различными значениями pH, начиная с 2,6 и увеличивая до 4,0 ед. рН. Температура колонки поддерживается между 36 °С и 80 °С и обычно программируемо повышается по ходу анализа. Значение pH буферного раствора и температура колонки выбираются таким образом, чтобы условия разделения были оптимальны и лишь незначительно различались по лабораториям.
Примечание — Колонку анализатора восстанавливают раствором гидроксида лития по 4.21 молярной концентрации 0,2—0,4 моль/дм3 с добавлением органического растворителя по 4.24 (этиленгликоль, моноэтил, метанол).
Пример схемы работы аминокислотного анализатора приведен в справочном приложении А.
- Хроматографический анализ раствора пробы
Проводят хроматографический анализ растворов проб, подготовленных по 7.2. Регистрируют площадь пика каждой аминокислоты, этаноламина и аммиака.
- Обработка и оформление результатов измерений
Массовую концентрацию каждой аминокислоты, этаноламина и аммиака Х1, мг/дм3, рассчитывают по формуле
X = K ’ Cst • Sam • V1 1 Sst ■ V
где К — градуировочный коэффициент по 6.4;
Cst — массовая концентрация норлейцина или норвалина (внутреннего стандарта), мкг/см3; Sam — площадь пика аминокислоты, этаноламина или аммиака;
V1 —объем разбавленной анализируемой пробы (V = 50 см3), см3;
Sst — площадь пика норлейцина или норвалина (внутреннего стандарта);
V2 — объем анализируемой пробы, см3.