8
- лучения гомогенной массы, но не более 5 мин.
- К полученной массе добавляют 10 г трихлоруксусной кислоты и снова тщательно перемешивают.
- Раствор сразу же помещают на 1 ч в холодильник для отстаивания. Затем отделившуюся жидкость отфильтровывают через складчатый бумажный фильтр.
- Если фильтрат мутный, его встряхивают один раз с равным объемом диэтилового эфира. Затем из фильтрата пипеткой удаляют слой эфира и добавляют равное количество этилового спирта к водной фазе фильтрата. Фильтрат встряхивают в течение 1 мин. Дают жидкости отстояться в течение нескольких минут и фильтруют через складчатый бумажный фильтр.
- Хроматографическое разделение
- Элюент заливают в стеклянную хроматографическую камеру для проявления на глубину от 5 до 10 мм и закрывают камеру крышкой. Отстаивают в течение 30 мин при комнатной температуре в темном прохладном месте.
- 0,003 см3 экстракта (или 0,006 см3 экстракта, если была проведена очистка фильтрата по 7.3.4) наносят на линию старта по карандашной линии, проведенной на расстоянии около 2 см от края пластины. Экстракт наносят по 0,001 см3 так, чтобы пятнышки были небольшими.
После нанесения экстракта пластины просушивают потоком теплого воздуха с помощью тепловентилятора.
Примечание — Следует избегать струи горячего воздуха в связи с опасностью гидролиза фосфатов.
- Таким же образом, точно на таком же расстоянии от дна хроматографической камеры наносят 0,003 см3 контрольного раствора на пластинку на расстоянии от 1 до 1,5 см от пятнышка пробы.
- Затем снимают крышку хроматографической камеры для элюирования, в нее быстро, но аккуратно помещают пластинку с целлюлозой, крышку закрывают. Разделение проводят при комнатной температуре в темноте.
- Проявление продолжают до тех пор, пока фронт растворителя не поднимется приблизительно на 10 см от карандашной линии. Вынимают пластину из камеры и сушат в течение 10 мин в сушильном шкафу при температуре 60 °С или в течение 30 мин при комнатной температуре или в потоке холодного воздуха.
- Обнаружение фосфатов
- Пластинку помещают вертикально под вытяжным шкафом и равномерно распыляют реагентом I. Сразу появляются желтые пятна.
- Пластинку высушивают в потоке теплого воздуха с помощью тепловентилятора, затем выдерживают в сушильном шкафу при температуре 100 °С в течение 1 ч для удаления следов азотной кислоты. Вынимают пластинку из сушильного шкафа и проверяют отсутствие едкого запаха азотной кислоты.
- Пластинку охлаждают до комнатной температуры, затем снова помещают под вытяжной шкаф и равномерно распыляют реагентом II. Сразу появляются голубые пятна.
Примечани е—Распыление реагентом II можно не проводить. Однако интенсивно окрашенные голубые пятна, образованные этим реагентом, значительно улучшают обнаружение полифосфатов.
- Обработка результатов
8.1 Сравнивают расстояния миграции пятен фосфата от анализируемой пробы с расстояниями миграции пятен от контрольного раствора.
В анализируемых пробах всегда на тонкослойной пластине присутствует пятно ортофосфата. Если проба содержит конденсированные фосфаты, на пластинке становятся видимы пятно дифосфата и/или пятна более высокополимеризованных фосфатов.