6
- Подготовка к проведению анализа
- Приготовление реагентов для выделения ДНК
Реагенты для выделения и очистки ДНК готовят по ГОСТ Р 52723.
- Приготовление реагентов и агарозного геля для электрофореза
Приготовление реагентов и агарозного геля для электрофореза проводят по ГОСТ Р 52723.
- Приготовление пробы
- Отбор проб яиц проводят по ГОСТ Р 53214 и ГОСТ Р 53404. Отбор и подготовку лабораторных проб яичных продуктов проводят по ГОСТ Р 53669. При отборе проб, их транспортировании и хранении должны быть приняты меры, исключающие перекрестную контаминацию (загрязнение одного образца другим). Для этого отбор проб проводят в перчатках, а инструменты, применяемые для отбора и измельчения материала, используют однократно или обрабатывают моющими средствами и стерилизуют в пламени спиртовки или газовой горелки при переходе от пробы к пробе. Отбор проб проводят вчистую стеклянную или пластиковую посуду или одноразовые пластиковые пакеты.
Подготовку проб для анализа проводят в условиях ПЦР-лаборатории в зоне первичной обработки материала с соблюдением условий, указанных в ГОСТ Р 52723.
- Подготовка проб яиц
Яйца в скорлупе разбивают и осторожно, не повреждая желток, отделяют основную массу яичного белка. Оставшиеся желтки тщательно перемешивают или гомогенизируют до однородной массы, не допуская вспенивания. Далее поступают по 6.3.3.
- Подготовка проб жидких яичных продуктов
Содержимое тары с лабораторной пробой или каждой из доставленной потребительской тары с продуктом тщательно перемешивают при помощи одноразового шпателя. Затем отбирают из разных мест лабораторной пробы или из разных единиц потребительской тары по 1 см3 продукта, переносят в одноразовую пластиковую пробирку вместимостью 15 см3 и тщательно перемешивают, формируя объединенную пробу. Отбирают 1 см3 объединенной пробы, помещают в одноразовую микропробирку вместимостью 1,5 см3, маркируют и хранят до и после проведения анализа.
- Подготовка проб сухих яичных продуктов
От доставленной лабораторной пробы отбирают не менее 10 порций по 5—10 г каждая, помещая их в одноразовый полиэтиленовый пакет размером 20 х 30 см, и перемешивают при помощи одноразового шпателя, формируя объединенную пробу 50—100 г. От полученной объединенной пробы отбирают порцию массой примерно 10 г, помещают водноразовую, герметично закрывающуюся пробирку или контейнер, маркируют и хранят до проведения анализа. Если объединенная проба не является гомогенной, то отобранную от нее порцию предварительно растирают в фарфоровой ступке до однородного мелкодисперсного состояния.
- Подготовка проб яичных полуфабрикатов и кулинарных изделий
От поступившего на исследование лабораторного образца (или продукта в потребительской таре) отбирают не менее 10 порций по 5—10 г каждая и измельчают в фарфоровой ступке. Измельченный материал 50—100 г помещают водноразовый полиэтиленовый пакет размером 20 х 30 см, перемешивают при помощи одноразового шпателя. От объединенной пробы отбирают порцию массой примерно 10 г, помещают ее в одноразовую, герметично закрывающуюся пробирку или контейнер, маркируют и хранят до и после проведения анализа. Перед началом исследования маркированную пробу измельчают при помощи скальпеля (ножниц), помещают в фарфоровую ступку и растирают до однородного мелкодисперсного состояния.
6.4 Выделение и очистка ДНК
- От приготовленных по 6.3.2—6.3.5 проб отбирают с помощью автоматического дозатора 100—150 мм3жидкого яичного меланжа или 50—100 мм3 жидкого яичного желтка или с помощью одноразового шпателя отбирают 75—100 мм3 (по насыпному объему) сухого яичного продукта или 100—150 мм3 (по насыпному объему) яичного полуфабриката или кулинарного изделия и помещают в одноразовую микропробирку вместимостью 1,5 см3, которую затем маркируют. Для каждой пробы готовят три параллельные пробирки с яичным продуктом.
Минимальная масса отобранной для выделения ДНК пробы: сухие яичные продукты — 15 мг, жидкие яичные продукты, яичные полуфабрикаты или кулинарные изделия — 50 мг. При необходимости отбираемый объем пробы предварительно оценивают с помощью взвешивания с записью результата в