ГОСТ Р 54742—2011
6 Подготовка к проведению определения
6.1 Приготовление подвижной фазы
В мерную колбу вместимостью 2000 см
3
переносят 1—10 см
3
ледяной уксусной кислоты (4.8)
и деионизированной водой (4.7) доводят объем раствора до метки. Затем в отдельной мерной колбе
вместимостью 2000 см
3
смешивают 1620 см
3
деионизированной воды или приготовленного раствора
уксусной кислоты с 380 см
3
ацетонитрила.
Срок хранения подвижной фазы в емкости вместимостью 2000 см
3
из темно-окрашенного стекла
при комнатной температуре — не более 2 мес.
Примечание — Использование уксусной кислоты в подвижной фазе улучшает симметричность пиков и
эффективность колонки. Количество добавленной уксусной кислоты зависит от используемой колонки. При этом
необходимо учитывать, что добавление уксусной кислоты в подвижную фазу увеличивает вероятность влияния
бензоата натрия и сорбата калия на пики анализируемых компонентов пробы.
6.2 Приготовление стандартного раствора А из нарингина, гесперидина и неогесперидина
по 500 мкг каждого вещества в 1 г раствора
В мерной колбе вместимостью 100 см
3
точно взвешивают по 0,05 г каждого стандартного
вещества. В колбу добавляют 10 см
3
диметилформамида или диметилсульфоксида, перемешивают до
полного растворения и доводят до метки с помощью подвижной фазы, подготовленной по 6.1.
Срок хранения стандартного раствора А при комнатной температуре — не более 1 мес.
6.3 Приготовление стандартного раствора Б из бензоата натрия и сорбата калия
по 500 мкг/см
3
каждого вещества в 1 г раствора
В мерной колбе вместимостью 100 см
3
точно взвешивают по 0,05 г бензоата натрия и 0,05 г сор-
бата калия. Объем раствора в колбе доводят до метки подвижной фазой.
Срок хранения стандартного раствора Б при комнатной температуре — не более 1 мес.
6.4 Приготовление рабочих стандартных растворов
Стандартный раствор А, подготовленный по 6.2, разбавляют подвижной фазой в соотношениях
1:5, 1:10, 1:20, 1:50 и 1:100 и получают пять рабочих стандартных растворов с содержанием стандарт-
ных веществ 100, 50, 25, 10 и 5 мкг/г.
Срок хранения стандартных рабочих растворов при комнатной температуре — не более 1 мес.
6.5 Для проверки работы подвижной фазы и стабильности колонки готовят поверочный раствор.
Для этого в мерной колбе на 100 см
3
смешивают 10 см
3
стандартного раствора А и 10 см
3
стандартного
раствора Б. Объем раствора в колбе доводят до метки подвижной фазой.
Срок хранения поверочного раствора при комнатной температуре — не более 1 мес.
6.6 Подготовка проб к определению
4
6.6.1 10—20 см
3
анализируемой пробы центрифугируют при 10000 g и температуре 25° С в тече-
ние 10 мин. Затем пробу фильтруют через мембранный фильтр размером 25 мм и размером диаметра
пор 0,2 мкм.
Анализируемую пробу тщательно перемешивают, затем разбавляют в соотношении 1:1 водным
раствором ацетонитрила (40:60). Пробу фильтруют через нейлоновый фильтр размером 25 мм и раз-
мером диаметра пор 0,45 мкм с использованием предварительного фильтра из стеклянного волокна.
Ацетонитрил предотвращает адсорбцию флавоноидов разбавленной пробы на нейлоне. При расчете
результатов определения (см. формулу 7) учитывают величину разбавления исходного образца аце-
тонитрилом (фактор разбавления F). Не допускается использование фильтров из ацетата целлюлозы
или мембранных фильтров из полисульфона, так как они не устойчивы к ацетонитрилу. Также не до-
пускается использование мембранных фильтров на основе поливинилиденфторида (PVDF) или поли-
тетрафторэтилена (PTFE), т. к. эти материалы адсорбируют флавоноиды, что приводит к снижению их
содержания в анализируемой пробе.