ГОСТ Р 54744—2011
3
4.6 Колбы мерные по ГОСТ 1770 вместимостью 100 и 1000 см
3
.
4.7 Фильтры мембранные размером 25 мм и размером диаметра пор 0,45 мкм.
4.8 Шприц медицинский вместимостью 10 см
3
.
Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, не уступа-
ющих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необ-
ходимую точность измерения, а также реактивов и материалов по качеству не хуже вышеуказанных.
5 Отбор проб
Отбор проб — по ГОСТ 26313.
6 Подготовка к определению
6.1 Перед подготовкой кондиционируют картридж (4.3) путем элюирования через него 10 см
3
сме-
си ацетонитрила (4.4.9) и дистиллированной воды в соотношении 50 : 50 с помощью медицинского
шприца вместимостью 10 см
3
. После удаления шприца через картридж пропускают 10 см
3
воздуха. За-
тем проводят экстракцию 10 см
3
пробы. Отбрасывают первые 4—5 см
3
элюата и собирают следующие
4—5 см
3
. Полученную пробу фильтруют через мембранный фильтр и применяют для анализа методом
ВЭЖХ.
6.2 Приготовление градуировочных растворов
В подходящей лабораторной емкости взвешивают с точностью 0,1 мг по 0,200 г хинную (4.4.6),
яблочную (4.4.7) и лимонную кислоту (4.4.8). Переносят смесь кислот в мерную колбу на 100 см
3
.
Объем в колбе доводят дистиллированной водой до метки. Раствор фильтруют через мембранный
фильтр (4.7).
7 Проведение определения
7.1 Подготовка хроматографической системы
Хроматографическую систему последовательно кондиционируют метанолом (4.4.3) или смесью
из метанола и дистиллированной воды в соотношении 70:30, затем дистиллированной водой и фосфат-
ным буфером (4.4.4). В конце рабочего дня проводят очистку системы, используя перечисленные выше
реактивы в обратном порядке.
Предупреждение: запрещен контакт метанола с фосфатным буфером!
7.2 Условия определения
Для проведения хроматографического разделения выполняют следующие условия:
- скорость потока 0,8 см
3
/мин;
- спектрофотометрическое детектирование фракций при 214 нм, комнатной температуре и раз-
решении детектора 0,1 ед. оптической плотности.
Система колонок считается подготовленной, если в соковой продукции из клюквенного сока и
яблочном соке регистрируется видимое разделение между первым пиком сахарозы и хинной кислотой. В
хроматографическую систему для проверки линейности измерений вводят от 5 до 20 мкл градуиро-
вочных растворов (4.1) после каждых двух разделений растворов проб, для хроматографического раз-
деления проб используют по 5 мкл, полученных в ходе твердофазной экстракции (4.2). Проводят по два
параллельных определения для градуировочных растворов и проб.
В хроматограмме регистрируется такая последовательность выхода кислот — хинная, яблочная,
лимонная и фумаровая кислоты.
8 Обработка результатов определения
Процентную долю хинной, лимонной, яблочной или фумаровой кислоты в анализируемой пробе
К, %, вычисляют по формуле