ГОСТ Р 54744—2011
2
3 Сущность метода
Метод основан на предварительной твердофазной экстракции пробы с помощью одноразового
картриджа для удаления соединений, мешающих определению, фильтровании и хроматографическом
разделении в системе для проведения ВЭЖХ.
Хинная, яблочная, лимонная кислоты в ходе хроматографического определения разделяются с
использованием двух обращенно-фазовых хроматографических колонок и регистрируются с помощью
спектрофотометрического детектора при длине волны 214 нм. Расчет долей органических кислот, под-
тверждаемых хроматограммой, осуществляется путем сравнения с градуировочными растворами стан-
дартных веществ.
4 Приборы и реактивы
4.1 Хроматограф для ВЭЖХ
Хроматографическая система для ВЭЖХ состоит из инжектора, спектрофотометрического детек-
тора с возможностью регистрации фракций при длине волны 214 нм с разрешением 0,1 ед. оптической
плотности, программно-аппаратного комплекса для обработки результатов хроматографического раз-
деления (например, система Waters Associates, Inc., инжектор модель 7725i, детектор модель 2487,
компьютерный интегратор Hewlett-Packard 3390 или эквивалентная система).
4.2 Колонка аналитическая
18
18
18
Для хроматографического разделения используют аналитическую колонку [1] модель Supelcosil
LC-18 (или эквивалент) с размером частиц 5 мкм, длиной 250 мм и внутренним диаметром 4,6 мм с
последовательно подключенным картриджем модель Radial-Pak C(Waters Associates, Inc. или экви-
валент) с размером частиц 5 мкм, длиной 100 мм, с использованием радиального насосного модуля.
Картридж Radial-Pak Cдопускается заменить на любую стандартную обращенно-фазовую ко-
лонку Сиз нержавеющей стали с размером частиц 10 мкм.
В системе перед колонкой [1] необходимо использовать предварительную обращенно-фазовую
колонку модель Bio-Rad ODS-10 (или эквивалент). В качестве подвижной фазы используют фосфатный
буфер. Скорость элюирования составляет 0,8 см
3
/мин. Разрешение детектора должно составлять не
менее 0,1 ед. оптической плотности.
4.3 Картридж для твердофазной экстракции
18
Для твердофазной экстракции используют одноразовые картриджи модель Sep–Pak C(Waters
Associates, Inc. или эквивалент).
4.4 Реактивы
24
4.4.1 Калий фосфорнокислый однозамещенный (KH PO ) по ГОСТ 4198, х. ч.
4.4.2 Кислота ортофосфорная массовой долей не менее 85 %, х. ч.
4.4.3 Метанол (перед применением фильтруют через мембранный фильтр с размером пор
0,45 мкм), 95 %, ч. д. а.
4.4.4 Фаза подвижная ВЭЖХ — раствор 0,2 М КН
2
РО
4
с 2,4 ед. рН
24
Для приготовления подвижной фазы (фосфатного буфера) для ВЭЖХ взвешивают 27,2 г КН РО
(4.4.1) в химическом стакане. В стакан добавляют дистиллированной воды (4.4.5) до объема 950 см
3
. С
помощью рН-метра и ортофосфорной кислоты (4.4.2) доводят кислотность до 2,4 ед. рН. Раствор пере-
носят в мерную колбу на 1000 см
3
и доводят дистиллированной водой до метки. Раствор фильтруют
через мембранный фильтр с размером диаметра пор 0,45 мкм (4.7).
4.4.5 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
4.4.6 Кислота хинная (CAS-77-95-2), ч. д. а.
4.4.7 Кислота яблочная (CAS-6915-7), ч. д. а.
4.4.8 Кислота лимонная (CAS-77-92-9), ч. д. а.
4.4.9 Ацетонитрил, ч. д. а. (перед применением фильтруют через мембранный фильтр с разме-
ром диаметра пор 0,45 мкм).
4.5 Посуда лабораторная стеклянная по ГОСТ 25336.