ГОСТ 29185-91 С. 4
навеске продукта или его эквивалентном разведении эту навеску или разведение вносят в одну из
вязких питательных сред, приготовленных по п. 3.2.5 или 3.2.7, или 3.2.8.1, или 3.2.8.2.
4.3. Посевы по пп. 4.1.3. 4.1.4 и 4.2 инкубируют при (37 ± 1) *С не более 72 ч. Посевы на чашках
Петри инкубируют в анаэробных условиях по ГОСТ 30425. Ежедневно посевы просматривают для
обнаружения признаков роста сульфитредуиирующих микроорганизмов — почернения сульфитной
среды.
4.4. Из посевов в вязкие среды отбирают пробки с признаками роста - отдельными черными
колониями или полностью почерневшей питательной средой на глубине свыше I см. Из отобранных
пробирок проводят пересевы петлей в чашки Петри на поверхность одной из агаризованных сред,
приготовленных по п. 3.2.5 или 3.2.6. или 3.2.7, или 3.2.8, или 3.2.8.2 так. чтобы получить рост
изолированных колоний. Посевы инкубируют в анаэробных условиях при (37 ± 1)’С в течение
24-48 ч.
4.5. Из посевов на агаризованные среды (см. п. 4.1.4) отбирают чашки, на которых выросло от 15
до 150 характерных колоний.
4.6. Не менее 5овальных черных или окруженных черным или серым ореолом колоний диамет
ром 4 -5 мм, отобранных по п. 4.4 или 4.5, высевают раздельно в свежерегенерированную по
ГОСТ 30425 среду, приготовленную по п. 3.2.9.
Посевы инкубируют при (37 ± 1) ‘С не более 48 ч.
4.7. Подтверждение принадлежности выделенных сульфитредуиирующих микроорганизмов к роду
Clostridium
4.7.1. Мнкроскопированне
Из культур выросших, как указано в п. 4.6, готовят два препарата и окрашивают по
ГОСТ 30425, первый - по Граму. второй —для выявления бактериальных спор.
Сульфитредуцнруюшие клостридии представляют собой грамположительные палочки, распо
лагающиеся водиночку, попарно, в виде цепочек или скоплений параллельных клеток. При спорооб
разовании споры сульфитредуиирующих клострндий овальные или сферические, субтерминальные
или терминальные.
4.7.2. Определение отсутствия каталазы
Отсутствие каталазы в культурах, выросших, как указано в п. 4.6, определяют по ГОСТ 30425.
Сульфитредуцнруюшие клостридии каталазу не образуют.
4.7.3 Подтверждение анаэробного роста
Подтверждение анаэробного роста проводят посевом по ГОСТ 30425 культур, выросших, как
указано в п. 4.6. в чашки Петри под стекло или в трубки Вейона. Для посева используют одну из
агаризованных питательных сред, приготовленных по п. 3.2.5 или 3.2.6, или 3.2.7, или 3.2.8, или
3.2.8.2. Посевы инкубируют в аэробных условиях при (37 ± 1) *Св течение 18-72 ч.
Для сульфитредуцнрующих клостридий характерен анаэробный рост.
Допускается взамен подтверждения анаэробного роста проводитьопределение отсутствия роста
в аэробных условиях. При этом культуры высевают в чашки Петри на поверхность агаризованной
среды.
Посевы инкубируют в аэробных условиях при (37 ± 1) "С в течение 18—72 ч.
5. ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ
5.1. Результаты испытания оценивают по каждой пробе отдельно.
5.2. Если при изучении культуральных, морфологических и биохимических свойств обнаружены
сульфитрелупирующие грамположительные, каталазоотрицательные, способные расти в анаэробных
условиях микроорганизмы, то дают заключение о том, что эти микроорганизмы относятся к сульфит
-редуцирующим клострилиям.
5.3. Если при подтверждении характерных колоний в 80
%
случаев, то есть не менее чем в 4 из 5
колоний подтвержден рост сульфитредуиирующих клострндий, то считают, что все характерные коло
нии, выросшие на чашке Петри (см. п. 4.5), принадлежат к этой группе. Востальных случаяхколичество
сульфитредуиирующих клостридий определяют исходя из процентного отношения подтвержденных
колоний к общему количеству характерных колоний, взятых дтя подтверждения.
5.4. При определении НВЧ иди при определении присутствия (отсутствия) сульфитредуцирую-
шнх клостридий в определенной навеске продукта посевы в вязкие среды считают положительными.
101