ГОСТ 21SIS— Тб Стр. 9
|рез плотный фильтр (синяя лента). Фильтраты должны быть про
зрачными. Испытание проводят в двух повторностях.
Одновременно ставят две контрольные пробирки, куда вместо
раствора пепсина вносят 0.2 мл воды. pH которой предварительно
доводят до 1,8±0,05. Оптическую плотность фильтратов измеряют
против воды на спектрофотометре при длине волны 280 им в кюве
тах с рабочей длиной I см.
Из среднеарифметической величины оптической плотности двух
параллельных растворов пепсина вычитают среднюю арифметичес
кую величину оптической плотности контрольных растворов. Полу
ченную величину откладывают но оси ординат при построении гра
дуировочного графика, а по оси абсцисс — соответствующие вели
чины концентрации пепсина в микрогрэммах.
По градуировочному графику находят фактор А, т. е. содержа
ние пепсина в микрограммах, соответствующее 1 единице оптичес
кой плотности.
Для расчета фактора Л используют участок градуировочной
кривой с линейной зависимостью между величиной оптической
плотности и количеством пепсина. На этом отрезке кривой распет
-фактора А проводят по любой точке. Например, 3,2 мкг шелейна
соответствуют оптической плотности 0,2, следовательно, фактор А
равен 16 (3,2:0,2).
3.12.2.4.Построение градуировочного графика для определения
■содержания пепсина фотометрическим способом
Готовят рабочие растворы стандартного препарата пепсина с
различной концентрацией фермента и проводят реакцию с гемогло
бином, как указано в п. 3.12.2.3.
Затем к 2.5 мл фильтрата, полученным от каждого из последо
вательных разведений пепсина, прибавляют по 5 мл 0.5 н. раствора
едкого натра и 1,5 мл реактива Фолина. Растворы перемешивают
и через 10 мин определяют их оптическую плотность. Одновремен
но ставят контрольные пробирки, в которые вместо раствора
пепси на вносят 0,2 мл воды; pH воды предварительно
доводят до 1.8±0,05.
Оптическую плотность растворов определяют против воды на
фотоэлестроколориметре при красном светофильтре в кюветах с
рабочей длиной 0.5 см. Из среднеарифметической величины опти
ческой плотности двух параллельных растворов пепсина вычитают
среднюю арифметическую величину оптическойплотности конт
рольных растворов. Полученную величину откладывают по оси ор
динат при построении градуировочного графика, а по оси абсцисс—
соответствующие величины концентрации пепсина в микрограммах.
По градуировочному графику находят фактор А. т. е. содержа
ние пепсина в микрограммах, соответствующее 1 единице оптичес
кой плотности.