Стр. 8 ГОСТ 31825—7*
пепсин (стандартный препарат);
воду дистиллированную но ГОСТ 6709—72.
3.12.2. Подготовка к испытанию
3.12.2.1. Приготовление 2%-ного раствора лиофнлилированного
гемоглобина
Навеску гемоглобина растворяют в небольшом количестве воды
и 0,3 н. раствором соляной кислоты, потенциометрпчески доводят
pH до 1,8±0,05. Затем раствор доливают дистиллированной водой
до необходимого объема.
3.12.2.2. Приготовление реактива Фолина
Реактив Фолина готовят в круглодонной на I л колбе на огне
упорного стекла с обратным холодильником. В колбу помещают
100 г вольфрамонокислого натрия, 25 г молибденовокислого натрии
и 700 мл дистиллированной воды. После полного растворении солей
в колбу добавляют 50 мл 85%-ной ортофосфорной кислоты и
100 мл концентрированной соляной кислоты. Содержимое колбы ос
торожно, но хорошо перемешивают. К колбе присоединяют обрат
ный холодильник и смесь кипятят (не слишком сильно) в течение
10 ч. Кипячение можно вести с перерывом, но учитывают лишь пе
риод кипения. После окончания кипячения в смесь добавляют 150
г сернокислого лития, 50 мл дистиллированной воды и 5 капель брома
(осторожно). Для удаления излишка брома раствор кипятят 15 мин
без холодильника под тягой. После охлаждения готовый
раствор доводят в мерной колбе до 1 л, фильтруют через бумаж
ный фильтр и хранят в темной склянке с притертой пробкой в тем
ном месте. Реактив Фолина должен быть соломенно-желтого цвета
без зеленого оттенка. Затем в реактиве определяют концентрацию
кислоты. Для этого приготовленный реактив разводят дистиллиро
ванной водой 1:10 (1 мл реактива и 9 мл воды) и титруют 0,1 и.
раствором гидрата окиси натрия по фенолфталеину (3—4 капли).
Кислотность рассчитывают делением количества миллилитров 0,1 н.
щелочи, израсходованного на титрование 1 мл реактива Фолина,
на 10. Реактив Фолина имеет кислотность 1,6—2,3 н.
3.12.2.3. Построение градуировочного графика для определения
содержания пепсина спектрофотометрическим способом
Готовят рабочие растворы стандартного препарата пепсина с
концентрацией фермента 5, 10, 20, 30, 40. 50 мкг/мл. pH каждого
раствора лотенциометрическн доводят 0.02 н. соляной кислотой до
1,8±0,05
В шесть пробирок вносят по 1 мл 2%-ного раствора локализи
рованного гемоглобина, предварительно нагретого в течение 5 мин
в термостате :прн температуре 37°С, прибавляют по 0,2 мл одного
из последовательно разведенных растворов пепсина и инкубируют
при температуре 37’С в течение 10 мин (но секундомеру). В пробир
ки прибавляют по 5 мл 5%-ного раствора трихлоруксуснон кисло-
ты’и оставляют в термостате еще на 5 мин, а затем фильтруют че-