ГОСТ 18287—81 Стр. 5
то на 30—40 м н.
пипетки мерные по ГОСТ 20292 —74;
фильтры бумажные;
натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328—77, 0,1 н. раствор;
кислоту соляную концентрированную по ГОСТ 3118—77, 0,1 н.
раствор;
хлороформ по ГОСТ 20015—74;
казеин уксуснокислый, бактериологический;
натрий углекислый безводный по ГОСТ 83—79;
медь сернокислую по ГОСТ 4165—78;
калий виннокислый по ГОСТ 3655—77 или натрий виннокислый
2-водный по ГОСТ 3656—78, 1%-ный раствор;
натрий вольфрамовокислый по ГОСТ 18289—78;
кислоту ортофосфорную, 85%-ный раствор;
литий сернокислый 1-водный но ГОСТ 10563—76;
бром по ГОСТ 4109—79;
воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72.
3.5.2. П о д г о т о в к ак и с п ыт а н и ю
3.5.2.1.Приготовление 0,.7%-ного раствора белка-казеина
Навеску казенка, растертого до порошка, массой 2 г. взвешен
ную с погрешностью нс более 0,01 г, смешивают в ступке с 16 см*
0.1 и. натрия гидрата окиси и растирают до получения однородной
массы. Полученную массу переносят в колбу с 16 см3 дистиллиро
ванной воды и прогревают при помешивании в течение 1 ч при
50ГС на водяной бане, охлаждают и доводят дистиллированной
вопой до ЗСО см3. Измеряют pH раствора и осторожно, добавляя
по каплям 0,1 н. щелочь или 0,1 н. кислоту, доводят pH до 8,0—8,3.
Объем раствора казеина с pH 8,0—8,3 доводят дистиллирован ной
водой до 320 см* и центрифугируют 20 мин при 3000 об/мин.
После центрифугирования раствор казенна должен слегка опалес
цировать. Если раствор мутный, его осветляют, добавляя 1,0 см1
хлороформа и встряхивая в течение 5 мин при комнатной темпе
ратуре. после чего вновь центрифугируют.
В приготовленном растворе определяют концентрацию белка-
казеина по Лоури (см. обязательное приложение 1). Для опреде
ления раствор разводят 1:10 (1,0 см3 раствора и 9.0 см8 дистилли
рованной воды) и берут в пробирку 1 см3, добавляют 5 см3 реак
тива С, перемешивают и через 10мин добавляют 0,5 см3 реактива Е.
Одновременно ставят контроль на реактивы, для чего вместо
раствора казеина берут 1 см3 воды и добавляют тс же реактивы,
что и в образец. Смеси хорошо’перемешивают и ставят в темное
мес
Интенсивность
и
окраски измеряют на фотоэлектроколориметрс
при длине волн 625—700 нм (красный светофильтр) против во
ды в кюветах с рабочей длиной 5 мм. Из величины оптической
плотности испытуемого образца вычитают величину оптической
плотности контроля на реактивы н по полученных! значениям, с