Стр. 4 ГОСТ 25587— 83
Через 72 ч инкубации пять эмбрионов охлаждают при темпе
ратуре 4°С в течение 12—18 ч, остальные пять инкубируют до
120 ч, а затем охлаждают при 4°С в течение 16—18 ч.
Перед вскрытием эмбрионов скорлупу над воздушным прост
ранством дезинфицируют 5%-ным раствором йода или фламби-
руют, вскрывают и собирают экстраэмбриональную (аллантоис
но-амниотическую) жидкость в стерильные пробирки от каждого
эмбриона отдельно. Велогенные штаммы вируса убивают куриные
эмбрионы через 32—60 ч инкубации, мезогенные —через 60—90 ч,
лентогенные — через 100 ч и более.
Взятые из каждого эмбриона образцы экстраэмбриональной
жидкости проверяют на гемагглютинирующую активность вируса
в капельной реакции гемагглютинации(РГА), которую ставят
на стекле путемсмешивания каплиэкстраэмбриональной жид
кости с каплей 1%-ной взвеси эритроцитов кур.
При отсутствии РГА экстраэмбриональную жидкость, взятую
в количестве 1 см3 от каждого зараженного эмбриона (не ме
нее 5), соединяют и повторно заражают развивающиеся куриные
эмбрионы 9—10-суточного возраста (не менее 10 эмбрионов).
Выделение вируса проводят в течение 3—5 пассажей на кури
ных эмбрионах, проверяяв каждом пассаже экстраэмбриональ
нуюжидкость на наличие гемагглютининовв капельной РГА.
Если титры гемагглютининов низкие, проводят еще 2—3 допол
нительных пассажа.
2.1.4. Обработка результатов
Пробу испытуемогоматериала считаютотрицательной, если
во всех проведенных пассажах не будут обнаружены гемагглюти-
нация эритроцитов и патогенное действие вируса (гибель эм
брионов).
При наличиигемагглютинации эритроцитовили гибели эм
брионов проводят идентификацию выделенного вируса, определя
ют титр и вирулентность вируса на эмбрионах кур.
2.2.Методп о с т а н о в к иреакцииг е м а г г л ю т и н а
ции
Сущность метода заключается в способности вируса болезни
Ньюкасла агглютинировать эритроциты кур.
2.2.1. Аппаратура,, материалы и реактивы
Для проведенияисследования применяют аппаратуру, мате
риалы и реактивы, указанные в п. 2.1.1 и дополнительно:
микротитратор Такачи;
доски из плексигласа.
2.2.2. Проведение исследования
Готовят двукратные .разведения вируссодержащего материа
ла от 1:2 до 1: 1024. Для этого в ряд лунок планшетки из плек
сигласа (или пробирок)наливают физиологический раствор в
34