С. 3 ГОСТ 29138-91
4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ
4.1. Тиамин определяют в двух параллельных навесках продукта.
4.2. Г и д рол и з
Навеску продукта массой 10,0 г* помешают в колбу вместимостью 250 см3и приливают 150см3
раствора соляной кислоты концентрации 0,1 моль/дм3.
Гидролиз осуществляют на кипящей водяной бане в течение 40 мин. закрыв горло колбы во
ронкой диаметром 35 мм.
Содержимое колбы следует периодически перемешивать, особенно в первые 5 мин.
По окончании гидролиза колбу охлаждают до комнатной температуры и с помощью насыщен
ного водного раствора уксуснокислого натрия доводят pH гидролизата до 4.5±0.1 (потенииометри-
чески).
После этого к гидролизату добавляютнавеску амилоризина массой 0,10 г, 2—3 капли толуола и
затем колбу помещают в термостат на 14—16 ч при температуре 37 “С. После этого гидролизат
охлаждают, доводят объем до 250 см3дистиллированной водой и фильтруют. В фильтрате определя
ют содержание тиамина.
Если имеется необходимость прервать анализ на 1—2 дня, то перед доведением объема до
250 см3гидролизат кипятят 5 мин, охлаждают, доводят объем до 250 см3 и фильтруют. До проведе
ния анализа фильтрат хранят в холодильнике в плотно закрытой колбе.
4.3. О ч и с т к а ф и л ь т р а т а от п р и м е с е й , м е ш а ю щ и х о п р е д е л е н и ю
В день проведения испытания 25 см3фильтрата переносят в делительную воронку вместимос
тью 250 см3, добавляют 25 см3бутилового или изобутилового спирта. Воронку встряхивают в тече
ние 1мин и после отстаивания для разделения слоев водный слой (нижний) собирают в колбу вмес
тимостью 100 см3.
Аналогичным образом поступают с приготовленным рабочим стандартным раствором тиамина.
4.4. О к и с л е н и е т и а м и н а в т и о х р о м
В три конические колбы отмеривают по 5 см3 очищенного гидролизата. Затем вдве из них до
бавляют по 1,2 см3окислительной смеси, а втретью — 1,2 см3раствора гидроокиси натрия концен
трации 0.3 г/см3(контрольный раствор к испытуемому раствору). Все колбы энергично встряхива
ют, прибавляют по 10см3изобутилового спирта и снова энергично встряхивают в течение 1мин для
изатечения тиохрома. Водный и спиртовой слои разделяют отстаиванием в темном месте. Затем
спиртовой слой (верхний) сливают в кюветы для измерения интенсивности флюоресценции.
Аналогичным образом поступают с очищенным рабочим стандартным раствором тиамина.
Время с момента начала экстракции тиохрома до измерения его флюоресценции не должно
превышать 30 мин.
4.5. И з м е р е н и е ф л ю о р е с ц е н ц и и т и о х р о м а
При работе на флюорометре марки ЭФ-ЗМА устанавливают светофильтры дтя В,, стрелка
прибора выводится на нулевое деление по воздуху, затем на деление 50 единиц —по экстракту ти
охрома из рабочего стандартного раствора.
При работе на флюорометре марки ФМ-Ц-2 устанавливают светофильтры, дающие длины
волн возбуждения 360 нм и флюоресценции —420 нм.
Измерение интенсивности флюоресценции растворов осуществляют по отношению к бутило
вому или изобутиловому спирту.
При работе на флюорометрах других марок интенсивность флюоресценции тиохрома измеря
ют при светофильтрах, дающихдиапазон длин волн возбуждения в области 360—390 нм и флюорес
ценции —400—450 нм.
5. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ
5.1. Массовую дано тиамина (А), мг на 100 г продукта, вычисляют по формуле
X =
(В-В^-У, .т-10
или ^
(В-В,)-2
.
где
Л
—интенсивность флюоресценции испытуемого раствора, среднее из двух параллельных опре
делений, ед. прибора;
• Масса навески должна обеспечить концентрацию тиамина я измеряемом растворе в диапазоне
0.10—0.40 мкт/сы5, что при данных навеске и разведениях будет соответствовать содержанию тиамина в про
дукте 0.25—1.00 мг/100 г.