ГОСТ 28621-90 С. 5
8. НАНЕСЕНИЕ ПЯТЕН НА ПЛАСТИНУ
8.1. Общее замечание
Технику нанесения пятен на тонкослойные пластины нельзя описать точно, хотя можно дать
несколько главных правил и рекомендаций. Гем не менее каждый исследователь должен выработать
на практике свой собственный метод нанесения пятен.
8.2. Количество противостарителя
Как правило, требуется 50—100 мкг противостарителя.
Необходимое количество противостарителя. как правило, 50—100 мкг. Иногда можно опреде
лить и меньшее количество.
8.3. Количество используемого раствора
Наилучшие хроматограммы получаются при объеме наносимого на пластину раствора образца
5 мкл или меньше; допускается и 10 мкл. но большие объемы размывают пятно и ухудшают процесс
разделения. Размывание пятна зависит от применяемого растворителя, особенно сильное размыва
ние происходит при использовании ацетона.
8.4. Концентрация испытуемого раствора
Как следует из пп. 8.2 и 8.3. идеальным вариантом яатяется использование раствора антиок
сидантов с концетрацией 10—20 г/дм1. При данной концентрации некоторые сложные смеси могут
образовывать паюсы (хвосты). Если есть образование полос (хвостов), то целесообразно уменьшить
количество образца для получения дискретных пятен компонентов смеси.
8.5. Метод нанесения пятен
8.5.1. На одну пластину можно нанести несколько проб или поочередно пробы и известные
вещества, пятна которых должны располагаться на расстоянии по крайней мере 2 см друг от друга.
Четыре полоски могут использоваться для цветного проявления с помощью одного проявителя и
четыре полоски —с помощью другого, при этом применяется маска (п. 5.12).
8.5.2. Наносят пятна с помощью микропипетки (п. 5.6) на стартовую линию, отстоящую от
края пластинок приблизительно на 25 мм, располагая каждое пятно на расстоянии не менее 2 см
друг от друга. Растворитель испаряют. После этого пластина готова для хроматографирования.
9. ХРОМАТОГРАФИРОВАНИЕ ПЛАСТИНЫ (ЭЛЮИРОВАНИЕ)
9.1. Метод А
Помещают каждую пластину в подготовленную камеру (радо. 6), содержащую смешанный
растворитель (п. 4.4.1), при этом в каждой камере должна находиться только одна пластина. Плас
тина не должна находиться близко к стенкам камеры и уровень растворителя в камере должен быть
ниже стартовой линии (линии, на которую нанесены пятна). Камеру закрывают крышкой и проводят
элюирование —дают фронту растворителя продвинуться от стартовой линии на 150 мм. Вынимают
пластину, отмечают место фронта растворителя —финишную линию — и высушивают в течение
нескольких минут на воздухе. Для удаления последних остатков растворителя можно применять
слабое нагревание пластины до невысокой температуры (не более 50 *С).
9.2. Метод В
Если по методу Л (см. п. 9.1) не удается достигнуть удовлетворительного разделения пятен, то
можно использовать растворы для элюирования по пп. 4.4.2.1—4.4.2.4, 4.4.3.1 в перечисленном
порядке. Каждая система растворителей требует дополнительно приготовленной пластины с нане
сенными на нее пятнами.
10. ЦВЕТНОЕ ПРОЯВЛЕНИЕ НА ПЛАСТИНЕ
10.1. Метод А
10.1.1. Противостарнтели аминного типа
Проявляют пластину или необходимый ее участок (п. 8.5.1), опрыскивая ее поверхность рас
твором диазотированной сульфаниловой кислоты (п. 4.5.1), пока не появится окраска.
Значение Rf вычисляют по формуле
Rf =
расстояние, пройденное передним краем пятна от стартовой линии (п. 8.5.2)
расстояние, пройденное фронтом растворителя от стартовой линии