С. 6 ГОСТ 29312-92
Иглы инъекционные № 0625 или 0420 по ГОСТ 25377*.
Пробирки серологические.
Пипетки мерные вместимостью 1, 2 и 5
c m j п о
ГОСТ 29227.
Мышата белые нелинейные 4—6-суточного возраста.
Белые мыши-самки лактируюшие (кормилицы).
Культуры клеток СП. выращенные в пробирках, флаконах вместимостью 50—100 см’ или в
пенициллиновых флаконах и отмытые от ростовой среды.
Раствор солевой Эрла с 0,5 % гидролизата лактальбумнна (pH 7,6) и антибиотиками по стан
дартной прописи (поддерживающая среда).
Натрий хлористый по ГОСТ 4233, раствор концентрации 0.15 моль/дм3(pH 7,0—7,2).
Хлороформ свежедистиллированный или отмытый от водорастворимых фракций.
Вода деионизированная или дистиллированная по ГОСТ 6709.
3.7.2. Подготовка к испытанию
Сухие антигены в количестве 5 ампул предварительно регидратируют в исходном объеме водой
или раствором хлористого натрия концентрации 0,15 моль/дм’ и готовят два разведения 1:10 и 1:100
на солевом растворе Эрла с гидролизатом лактальбумнна и антибиотиками. Флаконы (пробирки) с
монослойной культурой клеток СП освобождают от поддерживающей среды.
3.7.3. Проведение испытания
3.7.3.1. Выявление вируса с использованием культуры клеток
Каждое разведение испытуемого антигена вносят в 3—5 флаконов вместимостью 50—100 см’
или 5—10 пробирок (пенициллиновых флаконов) с монослойной культурой клеток СП в объеме 1,0;
0,2 и 0,1 см5 соответственно на I ч при 37 “С. Затем растворы антигена удаляют,
монослойные культуры ополаскивают поддерживающей средой, подогретой до 37 *С, вносят
свежие порции поддерживающей среды в объеме 10; 2 и I см’ соответственно и инкубируют при
37 ‘С в течение 5 сут. В случае выявления признаков дегенерации монослоя клеточные культуры
промораживают, оттаивают, осветляют центрифугированием и используют дтя пассажа на
культуре клеток СП.
При появлении признаков дегенерации монослоя клеток и во втором пассаже полученную
культуральную жидкость после термолиза эмульгируют в течение 3—5 мин с хлоро(|юрмом (10—
15 %) дтя очистки от бдтластных веществ и исследуют в РСК по ГОСТ 253X4 на наличие специфи
ческих антигенов размножающегося вируса ящура.
3.7.3.2. Выяазение вируса с использованием белых мышат
Разведения испытуемого антигена вводят в дозе 0,1 см’ подкожно 10 белым мышатам, которых
вместе с двумя самками-кормилицами помешают в клетки дтя лабораторных животных. За иноку-
лированными животными наблюдают 7 сут. Павших в течение этого периода мышат
используютдтя дальнейшего пассирования. С этой целью готовят 10 %-ную суспензию
скелетной мускулатуры павшего мышонка на поддерживающей среде и очищают ее 10—15 %-ным
раствором хлороформа. Вслучае гибели мышат во втором пассаже готовят 33—50 %-ную суспензию
их скелетной мускула туры, обрабатывают ее 10—15 %-ным раствором хлороформа и исследуют в
РСК по ГОСТ 253X4.
3.7.4. Обработка результатов
Антиген считают вирулентным, если выядзяемая в любом пассаже дегенерация монослойной
культуры клеток СГ1 или гибель мышат обусловлены репродукцией вируса с накоплением специ
фического комплеменсвязывающего антигена.
3.8. Определение стандартности расфасовки сухих сывороток и антигенов
Сущность метода заключается в определении колебаний массы препарата, высушенного в
ампулах.
З.Х.1. Аппаратура и реактивы
Шкаф сушильный с регулируемой температурой в диапазоне 60—105 "С.
Весы аналитические.
Вода деионизированная или дистиллированная по ГОСТ 6709.
3.8.2. Подготовка к испытанию
5 ампул сухого препарата освобождают от этикеток, тщательно моют и высушивают на воздухе
или в термостате при 37 *С в течение 30 мин.
З.Х.З. Проведение испытания
Высушенные ампулы порознь взвешивают, освобождают от содержимого, моют в воде, высу
шивают при 100 ’С в течение 60 мин и повторно взвешивают.
На территории Российской Федерации действует ГОСТ’25377—82.