ГОСТ 29312-92 С. 5
3.5.3.Определение активности штаммоспецифических антигенов
3.5.3.1. Подготовка к испытанию
Сухие антигены в количестве 5 ампул предварительно регидратируют в исходном объеме воды,
а затем готовят ряд разведении с интервалом в 1 log: с 1:2 до предельного титра, указанного на
этикетке. Штаммоспецифические сыворотки, гомологичные контролируемому антигену, и осталь
ные компоненты РСК готовят по ГОСТ 25384.
3.5.3.2. Проведение испытания
Реакцию связывания комплемента выполняют с 2 СЕ гомологичной сыворотки по ГОСТ 25384
в трехкратной повторности.
3.5.3.3. Обработка результатов
Результаты реакции учитывают визуально.
Предельным титром антигена (1 АЕ) считают максимальное разведение, обусловившее задерж
ку лизиса более 90 % эритроцитов в присутствии 2 СЕ гомологичной сыворотки.
За окончательный результат испытаний принимают среднеарифметическое значение результа
тов всех титрований, допустимые расхождения между которыми не должны превышать 1,0 log-,.
3.6. Определение специфичности
Сущность метода заключается в титровании типо- и штаммоспецифических сывороток и
эталонных антигенов в РСК с наборами гетерологичных иммунореагентов.
3.6.1. Аппаратура, материалы и реактивы — по п. 3.5.1.
3.6.2. Определение специфичности типо- и штаммоспецифических сывороток
3.6.2.1. Подготовка к испытанию
Сухие штаммоспецифические сыворотки в количестве 5 ампул регидратируют и разводят, как
указано в 3.5.2.1. Помимо гомологичного airrurena готовят рабочие разведения всех гетерологичных
антигенов и остальных компонентов РСК по ГОСТ 25384.
3.6.2.2. Проведение испытания
Реакцию связывания комплемента выполняют по ГОСТ 25384 с 2 АЕ гомологичного и
гетерологичных антигенов, в перечень которых при контроле типоспецифических сывороток
включают антигены всех 7 типов вируса ящура и возбудителей других везикулярных болезней, а
при контроле штаммоспецифических сывороток используют антигены актуальных вариантов
вируса ящура.
3.6.2.3. Обработка результатов
Результаты реакции учитывают визуально. Во всех повторностях с антигенами возбудителей
других везикулярных заболеваний реакция должна быть отрицательной, а с антигенами гетероло
гичных типов и вариантов —не превышать норм, установленных в табл. I.
В контроле всех разведений сыворотки без комплемента должна быть 100 %-ная задержка
лизиса эритроцитов, а в контроле без антигенов —их полный лизис.
3.6.3. Определение специфичности штаммоспецифических антигенов
3.6.3.1. Подготовка к испытанию
Контролируемые антигены разводят в количестве 5 ампул, как указано в п. 3.5.3.1. Рабочие
разведения гетерологичных сывороток и остальных компонентов РСК готовят по ГОСТ 25384.
3.6.3.2. Проведение испытания
РСК выполняют по ГОСТ 25384 в трехкратной повторности с 2 АЕ гомологичных и гетероло
гичных сывороток, в перечень которых включают сыворотки против всех 7 типов вируса ящура, а
также возбудителей других везикулярных болезней.
3.6.3.3. Обработка результатов
Результаты реакции учитывают визуально. Во всех повторностях с сыворотками других вези
кулярных болезней реакция должна быть отрицательной, а с сыворотками гетерологичных типов и
вариантов — не превышать норм, установленных в табл. 2.
В контроле всех разведений антигена без комплемента должна быть 100 %-ная задержка лизиса
эритроцитов, а в контроле без сыворотки —их полный лизис.
3.7. Определение вирулеигности штаммоспецифнческнх антигенов
Сущность метода заключается в выявлении биологической активности остаточного вируса при
инокуляции исследуемого антигена 4—6 сут мышатам или в монослойные культуры клеток первич-
но-трипсинизированных почек свиней 2—4-месячного возраста (СП).
3.7.1.Аппаратура, материалы и реактивы
Термостат на 37 *С.
Шприцы «Рекорд» вместимостью 1см3.