ГОСТ 30417-96
ма водяной бане (температура воды не выше 50 *С). периодически встряхивая. Раствор охлаждают,
добавляют 2—3 см3уксусного ангидрида, колбу плотно закрывают и оставляют на ночь для отстаи
вания. Затем верхнюю прозрачную часть раствора осторожно сливают через бумажный фильтр в
темную склянку с притертой пробкой. Раствор годен для работы через сутки.
4.3.2 Построение градуировочного графика
Перед построением градуировочного графика уточняют концентрацию ретинола ацетата или
ретинола пальмитата спектрофотометрическим методом в соответствии с [2| или |!|.
В мерной колбе взвешивают (0,10±0,01) г масляного концентрата витамина А (ретинола паль-
митага или ретинола ацетата). Результат взвешивания записывают до четвертого десятичного знака.
Растворяют концентрат в хлороформе, доводят хлороформом до метки и хорошо перемешивают.
Массовую долю витамина А в растворе Л",, м.е. в I см3, вычисляют по формуле
С| •ffl.
UK) ’
(
1
)
где с, —концентрация витамина А-ацетата (или А-пальмитата), м.е. в 1г масляного концентрата;
/я, —масса масляного концентрата, г;
100 —объем хлороформного раствора концентрата витамина А, см5.
Если концентрация витамина А-ацетата (или А-пальмитата) в масляном концентрате выражена
в процентах, то концентрацию витамина А Х2и Л’,, м.е. в 1см’ хлороформного раствора, вычисляют
по формулам:
(для витамина А-ацетата)
Ш
А", —с*
/и, ■2907000
’
(2)
Хх
=
Сз
Лз
(для витамина Л-пальмитата)
w, •1807000
(3)
100
где с2 — концентрация витамина Л-ацетата (или Л-пальмитата) в масляном концентрате, г;
т,— масса масляного концентрата, г;
2907000 —активность 1 г витамина А-ацетата с массовой долей 100 %, м.е.;
1807000 —активность 1 г витамина А-пальмитата с массовой долей 100 %, м.е.
Из хлороформного раствора витамина А готовят в пробирках растворы концентрацией вита
мина А от (5±2) до (40±2) м.е. в 1см3с интервалом 5 м.е. Из каждой пробирки отбирают пипеткой по
0,4 см3раствора в кювету толщиной 1см. помешают кювету в кюветодержатель фотоэлектроко
лориметра или спектрофотометра, добавляют 4 см3раствора треххлористой сурьмы, приготовленно
го по 4.3.1.5, и быстро измеряют оптическую плотность раствора при длине волны 620 нм. В качестве
контроля служит раствор, состоящий из 0,4 см3 хлороформа и 4 см5раствора треххлористой сурьмы.
Для построения градуировочного графика по оси ординат откладывают полученные значения опти
ческой плотности, а по оси абсцисс соответствующую им концентрацию витамина А, м.е. в I см3.
Примечания
1 Градуировочный график строится для каждого спектрофотометра или фотоэлеюроколориметра и
проверяется при смене партий реактивов и приборов путем измерения оптической плотности стандартных
растворовдвух разных концентраций.
2 В случае длительного хранения масляного концентрата витамина А необходимо один раз в полгода
проверять его концентрацию посоответствующему градуировочному графику.
4.4 Проведение измерения
(3±1) г растительного масла взвешивают в колбе. Результат записывают до четвертого десятич
ного знака. Добавляют (0,110,01) г аскорбиновой кислоты и 50 см3спиртового раствора гидроокиси
калия концентрации с (КОН) = 2 моль/дм’.
Колбу соединяют с обратным воздушным холодильником и смесь кипятят на водяной бане в
течение 30 мин. После этого содержимое колбы охлаждают и количественно переносят в делитель
ную воронку, дважды ополаскивая колбу порциями дистиллированной воды по 50 см3. Неомыляе мые
вещества экстрагируют тремя порциями этилового эфира по 50 см3.
Объединенный эфирный экстракт переносят в делительную воронку и промывают дистилли
рованной водой порциями 50—100 см3до нейтральной реакции по фенолфталеину.
Промытую эфирную вытяжку сливают в сухую колбу, добавляют (10±1) г сернокислого натрия
3
104