ГОСТ Р 51240-98
7.2.3 Раствор пробы
В фотометрическую кювету вносят 1,00 см-’ буферного раствора триэтаноламингидрохлорида
по 5.2. 0,10 см3 раствора НАДФ по 5.3, 0,10 см- раствора АТФ по 5.4. 0,10 cxi3 подготовленной
пробы по 7.1 и 1.90 см3дистиллированной воды. Раствор перемешивают пластиковым шпателем
или стеклянной палочкой, выдерживают 3 мин и измеряют оптическую плотностьраствора —(Л,)пр
относительно оптической плотности воздуха.
7.2.4 Ферментативная реакция и количественное определение
В каждую из кювет с контрольным раствором по 7.2.2 и раствором пробы по 7.2.3 вносят по
0.02 см3 суспензии ГК и Г6Ф-ДГ по 5.5, перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной
палочкой и выдерживаютот 10до 15мин. Затем измеряют оптические плотности растворов —(Л2)пр
и (Л,)к относительно оптической плотности воздуха.
Окончание реакции проверяют повторным считыванием показаний спектрофотометра через
2 мин. Если ферментативная реакция не завершилась через 15 мин и оптические плотности растворов
увеличиваются с течением времени, то значения (Л2)„р и (Л2)к определяют методом экстраполяции
на момент внесения суспензии ферметов ГК и Г6Ф-ДГ по 5.5.
Далее в каждую из кювет с контрольным раствором по 7.2.2 и раствором пробы по 7.2.3 вносят
по 0,02 см3суспензии фермента ФГИ по 5.6. перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной
палочкой, выдерживают от 10до 15 мин и затем измеряютоптические плотности растворов —(Л3)пр
и (А3)к относительно оптической плотности воздуха.
Окончание реакции проверяют повторным считыванием показаний спектрофотометра через
2 мин. Если ферментативная реакция не завершилась через 15 мин и оптические плотности
растворов увеличиваются с течением времени, то значения (Л3)пр и (Л3)к определяют методом
экстраполяции на момент внесения фермента ФГИ по 5.6.
8 Выражение результатов
8.1 В ферментативных реакциях, лежащих в основе данного метода, образующийся в кювете
НЛДФН приводит к изменению оптических плотностей растворов (Д4п.1ли АЛ0 ((ф), а его массовые
концентрации пропорциональны массовым концентрациям D-глюкозы и D-фруктозы.
М>-гл(6)
р
АЛ
ц
-Ф ~“ ^г)цр — Мэ —Л2)к.(7)
8.2 Массовую концентрацию D-глюкозы в пробер(П.гл>и/илн D-фруктозы в пробе рп.фр, г/дм3,
вычисляют в соответствии с законом Ламберта-Вера по формуле
Л Л ^ _(8)
р
е
8 Г, 1000 Л
А
’
V \-
где М — молярная масса глюкозы или фруктозы. 180.16 г/моль:
общий объем раствора в кювете,см3;
F — фактор разбавления по 7.1;
е — молярный коэффициент поглощения НАДФН.дм3ммоль- ■см- ‘;
- при длине волны 340 нм —6,3.
- при длине волны 365 нм —3.4 (ртутная лампа).
- при длине волны 334 нм —6.18 (ртутная лампа);
5 — толщина поглощающего слоя в кювете.см:
У2 — объем пробы.см3.
Если нет отклонений от объемов, указанных в 7.2.2 и 7.2.3, то
,
Ро.гЯ= 5,801.
FДА
|>-Г.|
(9)
р
Ро-фр
5,837 •
ГДА
D-Ф
(
10
)
8.3 При использовании имеющихся в продаже наборов реактивов численные коэффициенты
(5,801 и 5.837) и уравнениях (9) и (10) могут быть иными из-за изменения общего объема раствора
( V,) в кювете.
8.4 За результат испытаний принимают среднеарифметическое результатов двух параллельных
определений, округленное до десятых долей.
4132