ГОСТ Р 51240-98
4 Сущность метода и реакции
4.1 С у щ н о с т ь метода
Метод (1, 2] основан на фосфорилировании D-глюкозы и D-фруктозы под действием АТФ в
присутствии ГК с образованием Г-6-Ф и Ф-6-Ф, преобразовании Г-6-Ф под действием НАДФ в
присутствии Г6Ф-ДГ в глюконат-6-фосфат и НЛДФН, фотометрическом измерении массовой кон
центрации образовавшегося НЛДФН. эквивалентной массовой концентрации D-глюкозы; изомериза
ции Ф-6-Ф в Г-6-Ф в присутствии ФГИ. преобразовании Г-6-Ф под действием НЛДФ в присутствии
Г6Ф-ДГ в глюконат-6-фосфат и НЛДФН. фотометрическом измерении массовой концентрации
образовавшегося НЛДФН. эквивалентной массовой концентрации D-фруктозы в пробе.
4.2 Р е а к ц и и , п р о и с х о д я щ и е при о п р е д е л е н и и D - г л ю к о з ы :
D-глюкоза + АТФГК } Г-6-Ф + АДФ,(1)
Г-6-Ф + НАДФ’ 16Ф ДГ; глюконат-6-фосфат + НДДФН + Нч.<2)
4.3 Р е а к ц и и , п р о и с х о д я щ и е при о п р е д е л е н и и D - ф р у к т о з ы :
D-фруктоза + АТФГК , Ф-6-Ф + АДФ.
Ф-6-ФФГИГ-6-Ф.(4)
Г-6-Ф + НАДФ* Г6Ф~ДГ глюконат-6-фосфат + НЛДФН + Н*
(5)
5 Реактивы
5.1 Об щи е т р е бо в а ни я
При проведении анализа используют химически чистые или чистые для анализа реактивы.
Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов для определения
D-глюкозы и D-фруктозы при условии, что качество реактивов не ниже указанного в настоящем
стандарте.
Препараты триэтаноламингидрохлорида, дннатрневой соли р-ннкотинамидадениидинуклео-
тидфосфата (|3-НАДФ-№2) и дннатрневой соли аденозин-З’-трнфосфата (АТФ-1Ма2Н2-ЗН20) долж
ны содержать не менее 90 % основного вещества.
5.2 Б у ф е р н ы йр а с т в о рг и д р о х л о р и д ат р и э т а н о л а м и н аа к т и в н о й
к и с л о т н о с т ь ю 7,6 pH
14.0 г триэтаноламингидрохлорида и 0,25 г сернокислого магния по ГОСТ 4523 раслюряют в
80 см3 дистиллированной воды по ГОСТ 6709. Активную кислотность раствора устанавливают
равной 7,6 pH приблизительно 5 см3 раствора гидроокиси натрия по ГОСТ 4328 молярной концент
рации с (NaOH) = 5 моль/дм3. Объем раствора доводят дистиллированной водой до 100.0 см3.
Буферный раствор устойчив при температуре 4 ’С 1 мес.
5.3 Р а с т в о р НАДФ
0,06 г дииатрисвой соли р-никотинамцдадениндинуклеотидфосфата (р-НЛДФ-Ма2) растворя
ют в 6 см3дистиллированной воды по ГОСТ 6709. Раствор устойчив при температуре 4 *С 1 мес.
5.4 Р а с т в о р АТФ
0,3 г дннатрневой соли аденозин-5’-трифосфата (АТФ-№2Н2-ЗН20) и 0,3 г углекислого
кислого натрия по ГОСТ 4201 растворяют в 6 см3дистиллированной воды по ГОСТ 6709. Раствор
устойчив при температуре 4 *С 1 мес.
5.5 С у с п е н з и я ф е р м е н т о в ГК и Г 6 Ф- Д Г
Раствор гексокиназы массовой долей 0,002 г/см3 и удельной активностью не менее 280 Е/см3,
содержащий глюкозу в качестве субстрата и АТФ. и раствор глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы массовой
далей 0,001 г/см3 и удельной активностью не менее 140 Е/см3, содержащий глюкозы-6-фосфат в
качестве субстрата, смешивают с раствором сернокислого аммония по ГОСТ 3769 малярной концент
рации с ((NH4),S04) = 3,2 моль/дм3. Суспензия устойчива при температуре 4 *С 12 мес.
2
130