ГОСТ Р 51196-98
8.5 П р и г о т о в л е н и е р а с т в о р а п р о б ы и у д а л е н и е б е л к а
8.5.1 Навеску сухого молока (8.3) растворяют при помешивании стеклянной палочкой (6.9) в
20см3воды температурой от 40 до 50 ’С. количественно переносят в мерную колбу (6.4) вместимос
тью 100 см3 и охлаждают до комнатной температуры (20 *С).
8.5.2 К раствору в колбе (8.5.1) последовательно добавляют 5,0 см3раствора гексаиианофер-
рата (II) калия (5.1), 5.0 см’ раствора сульфата цинка (5.2), 10см3раствора гидроксида натрия (5.3),
тщательно перемешивая содержимое колбы после добавления каждого компонента и доводят
объем раствора водой до 100 см3. Снова тщательно перемешивают раствор и выдерживают 30
мин при комнатной температуре.
8.5.3 Содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр (6.8), отбрасывая первую по
рцию фильтрата.
8.6 О п р е д е л е н и е
8.6.1 В спектрофотометрическую кювету (6.11) пипеточным дозатором (6.5) вносят:
- 1,0 см3фильтрата (8.5.3);
- 1.0 см3буферного раствора (5.4);
- 0.20 см3растпора НАД (5.5);
- 0.02 см3суспензии ГГ1Т (5.8).
Содержимое кюветы перемешивают палочкой (6.10).
8.6.2 Кювету выдерживают 5 мин, затем измеряют оптическую плотность раствора относи
тельно воды при длине волны 340 нм.
В кювету добавляют 0.02 см3раствора L-ЛДГ (5.6) и 0,05 см3растпора D-ЛДГ (5.7). Раствор пе
ремешивают палочкой (6.10).
П р и м е ч а н и е — Раздельное определение L- и D-молочиых кислот и их лактатов в пробе можно
осуществить добавлением или L-ЛДГ или D-ЛДГ.
8.6.3 Раствор (8.6.2) выдерживают при комнатной температуре 45 мин и измеряют оптичес
кую плотность. Раствор выдерживают еше 15 мин и снова измеряют оптическую плотность (измере
ния после 60 мин реакции).
П р и м е ч а н и е — Если требуется определить содержание только L-молочной кислоты и се лакта
тов. измерения производят соответственно через 30 и 45 мин.
8.6.4 Рассчитывают разность измеренных значений оптических плотностей по формуле
АА = |(А „
60
—Л „о)—4(/1 „бо—Л n4s)l—1(4 к(Л—А ко)—4(4 Кб«—4
m
s
)1-
где 4 ий1)—оптическая плотность пробы через 60 мин (8.6.3);
Л1|в—оптическая плотность пробы через 5 мин (8.6.2);
A nls —оптическая плотность пробы через 45 мин (8.6.3);
Ак60—оптическая плотность контрольной пробы через 60 мин (8.6.3);
—оптическая плотность контрольной пробы через 5 мин (8.6.2);
A kJ}— оптическая плотность контрольной пробы через 45 мин (8.6.3).
П р и м е ч а н и я
1 В некоторых случаях может иметь место медленно текущая побочная реакция. Изменение оптической
плотности, вызванное этой реакцией, исключают зкстраполяиисй оптической плотности на нулевой момент
времени.
2 Если оптическую плотность измеряют через 30 и 45 мин. формула имеет вид
д л - 1(4n4s 4 „о) ЗЫ„
45
—А пзо>1-|<4 кц —43(ДА цзо>1-
где
А
„л, —оптическая плотность пробы через 30 мин (8.6.3);
4 кзо~ оптическая плотность контрольной пробы через 30 мин (8.6.3).
8.6.5Если разность оптических плотностей, рассчитанная в соответствии с 8.6.4, превышает
0,500. определение повторяют (8.6.1—8.6.4), разводя дистиллированной водой растворы пробы про дукта
(8.5.3) и контрольной пробы (8.4).
4