ГОСТ Р 51239-98
Сильно окрашенные продукты рекомендуется разбавить вбольшей степени, чем указано ниже.
При этом пробы с очень низкой концентрацией L-яблочной кислоты рекомендуется предварительно
осветлить путем центрифугирования.
Пробу разбавляют дистиллированной водой до получения значения массовой концентрации
L-яблочной кислоты в интервале от 0,02 до 0.35 г/дм3.Допускается использование при проведении
испытания окрашенной разбавленной пробы.
7.2 О п р е д е л е н и е
7.2.1 Общие требования
Определения проводят при постоянной температуре в интервале от 20 до 25 "С. Допускается
проводить определения при постоянной температуре в интервале от 25 до 37 *С при условии
получения равноценных результатов.
Абсорбционный максимум НЛДН находится при длине волны 340 нм. При использовании
спектрофотометра переменной длины волны все измерения проводят в максимуме поглощения
света НАДН. При использовании спектрофотометра с ртутной лампой измерения проводят при
длинах волн 334 или 365 нм.
Язя дозирования буферных растворов, а также растворов проб, ферментов и коферментов
используют только градуированные пипетки или автоматические дозаторы.
7.2.2 Контрольныйраствор
13фотометрическую кювету вносят 1.00 см3буферного раствора по 5.2,0.20 см3раствора НАД
по 5.3, 1.50 см’ дистиллированной воды и 0,01 см3 суспензии ГОТ по 5.4. Смесь перемешивают
пластиковым шпателем или стеклянной палочкой, выдерживают 3 мин и измеряют оптическую
плотность раствора относительно оптической плотности воздуха —(Л,),..
7.2.3 Раствор пробы
13кювету спектрофотометра (фотометра) вносят 1.00 см3 буферного раствора по 5.2. 0.20 см3
раствора НАД по 5.3, 1.40 см3дистиллированной воды, 0,01 см3суспензии ГОТ по 5.4 и 0,1 см3
подготовленной пробы. Смесь перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой,
выдерживают 3 мин и измеряют оптическую плотность раствора относительно оптической плот
ности воздуха —(/1|)„р.
7.2.4 Ферментативная реакция и количественное определение
13каждую из кювет с контрольным раствором по 7.2.2 и раствором пробы по 7.2.3 вносят по
0.01 см5 суспензии L-МДГ по 5.5 и перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной
палочкой. По окончании реакции (через 5—10 мин) измеряют оптические плотности растворов
относительно оптической плотности воздуха —(Л2)пр и (Л,)к. Окончание реакции проверяют по
вторным считыванием показаний прибора через 2 мин.
8 Выражение результатов
8.1 В ферментативных реакциях, лежащих в основе данного метода, образующийся в кювете
НЛДН приводит к изменению оптической плотности раствора (Д/1), а его массовая концентрация
пропорнионатьна массовой концентрации L-яблочной кислоты в пробе.
- И - А\ г {Л- л ^ •(3)
8.2 Массовую концентрацию L-яблочной кислоты в пробе р. г/см3, вычисляют всоответствии
с законом Ламберта-Вера по формуле
\1 И, F
(4
)
pU eSKlOOU
где М — молярная масса L-яблочной кислоты, 134.09 г/моль;
общий объем раствора в кювете, см3;
фактор разбавления по 7.1;
е — молярный коэффициент поглощения НАДФН. дм3-ммоль- 1см-
- при длине волны 340 нм — 6,3,
- при длине волны 365 нм —3,4 (ртутная лампа),
- при длине волны 334 нм —6,18 (ртутная лампа);
толщина поглощающего слоя в кювете, см;
объем пробы, см’.
123
3