ГОСТ Р 51443-99
повторение процесса экстракции. Если необходимо, экстракция может быть повторена большее
число раз.
П р и м е ч а н и е —Если приходится проводить экстракцию больше чем в два этапа, следует остерегать
ся образования эмульсии. Если имеется опасность неполной экстракции, рекомендуется начать процедуру с
самою начала, используя меньший объем или массу исследуемой порции продукта.
С помощью мерного цилиндра в делительную воронку вносят 50 см3 петролейиого эфира.
Воронку с содержимых» интенсивно встряхивают и дают возможность смеси отстояться в течение
небольшого промежутка времени, чтобы отделить органическую фазу.
Водную фазу объемом примерно 10 см5 отбрасывают.
Органическую фазу промывают 50 см* воды, осторожно взбалтывая экстракт. Как только
исчезнет слабое эмульгирование, которое может образоваться во время взбалтывания, отбрасывают
водную фазу.
Переносят органическую фазу в центрифужную пробирку, содержащую 2 гбезводного сульфата
натрия, используемого в качестве обезвоживающего агента. Смесь хорошо перемешивают стеклян
ной палочкой и центрифугируют. Фазу петролейиого эфира аккуратно сливают в мерную колбу
вместимостью 100 см*.
Осадок в центрифужной пробирке суспензируют всвежей порции петролейиого эфира объемом
30 см3, перемешивая стеклянной палочкой, и снова центрифугируют. Добавляют полученную сла-
боокрашениую фракцию петролейиого эфира к первой порции экстракта и доводят
петролейным эфиром объем до 100 см* (И,).
Измеряют оптическую плотность полученного раствора при длине волны 450 нм в кювете с
оптическим промежутком 10 мм; в качестве раствора сравнения используют петролейиый эфир.
8.3 Определение содержания отдельных фракций каротиноидов
Суспензируют от 28 до 30 г частично деактивированной окиси алюминия (по 7.2) примерно в
30 см* петролейиого эфира и помешают суспензию в хроматографическую колонку, предварительно
закупоренную небольшим тампоном из стеклянной ваты и частично заполненную петролейным
эфиром. Петролейиый эфир спускают до тех пор, пока уровень его не установится непосредственно
над поверхностью слоя окиси алюминия. Для того чтобы защитить заполнитель колонки от обра
зования в нем пузырьков, принимают меры к тому, чтобы температуры петролейиого эфира и окиси
алюминия значительно не различались между собой. Высота сдоя, заполняющего колонку,
должна быть примерно 8 см.
Экстракты общих каротиноидов в петролейном эфире, полученные по 8.2, количественно
переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 см3 и удаляют растворитель при температуре
примерно 40 *С под вакуумом, используя ротационный испаритель. Полученный остаток тотчас же
растворяют в нескольких кубических сантиметрах петролейиого эфира и с помощью пипетки
количественно переносят в хроматографическую колонку. Чтобы гарантировать отсутствие потерь
исследуемых веществ, круглодонную колбу ополаскивают небольшими порциями растворителя,
используя его примерно 10 см3.
Приме чание —При внесении исследуемого раствора в колонкуследует избегать какого-либо возму
щения слоя оксида алюминия; уровень исследуемого раствора должен достигать поверхности адсорбента без
всплеска, благодаря внесению растворителя небольшими порциями.
Элюируют отдельные фракции каротиноидов при скорости примерно 2 капли в секунду,
используя:
петролейиый эфир для фракции 1;
элюирующую смесь А для фракции II;
элюирующую смесь Б для фракции III.
С целью уменьшения общего объема элюага первые бесцветные порции стекающего раствора
отбрасывают. Чтобы гарантировать полное извлечение каждой из фракций, проводят элюирование
до тех пор. пока элюат не становится бесцветным.
Поскольку содержание отдельных фракций каротиноидов зависит от вида фруктов и напитков,
не представляется возможным указать определенные требуемые объемы элюентов. Однако практика
показывает, что при определении фракций I и II требуется примерно 50 см3элюента в каждом случае.
При высоком уровне содержания фракции II достаточно 100 см3 элюента, для фракции III обычно
достаточно от 80 до 100 см3. Объем элюатов доводят петролейным эфиром и отмечают
значение объема
V,
для каждой из фракций.
Измеряют оптическую атотпость растворов для каждой из фракций против холостого раствора —
петролейиого эфира, при длине волны 450 нм, используя кюветы с 10 мм оптическим промежутком.
4