ГОСТ I* 51416-99
Остаток растворяют в 5см’буферного раствора pH 5.28 и добавляют 5см’ нингцармнового реактива.
Перемешивают, переносят в кипящую водяную баню и оставляют на 15 мин. Охлаждают и разбавляют
буферным раствором pH 5,28. чтобы концентрация лизина в измеряемом растворе составляла приблизи
тельно 0.02 мкмолц/см3. (Пусть
У,
—объем полученного таким образом измеряемого раствора).
Измеряют поглощение на спектрометре при 570 нм против жидкости, представляющей смесь
одного объема буферного раствора и одного объема нингидринового реактива, которую предварительно
помещают на 15 мин в кипящую водяную баню, и после охлаждения разбавляют до объема
У,.
8.3.3.2.3 Градуировка спектрометра
Отбирают точно 5 см’ стандартного раствора лизина, прибавляют 5 см1нингидринового реак
тива. Перемешивают, ставят на 15 мин в кипящую водяную баню. Охлаждают и разбавляют до
100 см5буферным раствором pH 5.28.
Измеряют поглощение на спектрометре при тех же условиях, как в 8.3.3.2.2.
8.4 Недоступный лизин
8.4.1 Реакция диннтрофенилнрования
В колбу вместимостью 250 см5, где находится вторая навеска испытуемой пробы (с.ч.8.2), при
помощи пипетки переносят 8 см3раствора кислого углекислого натрия. Оставляют приблизительно
на 10 мин, помешивая время от времени. Затем добаатяют раствор ДНФБ, колбу закрывают,
содержимое перемешивают, следя затем, чтобы не осталось частичек, прилипших к стенкам колбы.
Смесь оставляют на ночь при комнатной температуре в темном месте.
8.4.2 Очистка
Жидкость выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре ниже 40 *С. Затем
в колбу добавляют 75 см1ди этилового эфира, перемешивают и дают отстояться. Выливают большую
часть диэтилового эфира с предосторожностями, чтобы не удалить при этом твердые частички.
Эту операцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 50 см’ днэтилового эфира.
Оставшиеся следы днэтилового эфира удаляют путем нагревания на ротационном испарителе.
8.4.3 Гидролиз хлористоводородной кислотой
В колбу вносят 150 см3 хлористоводородной кислоты и выполняют процедуры по 8.3.1. но
гидролизат, растворенный в буферном растворе pH 2,2, количественно переносят в мерную колбу
вместимостью 20 см3 (или 10 см5 при использовании ручной системы).
8.4.4 Хроматография гидролизата и определение по 8.3.2 и 8.3.3.
Вручном варианте измерение на спектрофотометре можно проводить после разбавления смеси
лизин плюс реактив до 20 см’ буферным раствором pH 5.28. (Пусть
V,
—объем полученного таким
образом измеряемого раствора)
8.5 Количество определений
Проводят два параллельных определения, используя две разные пары навесок испытуемой пробы.
9 Обработка результатов
9.1 Метод вычисления общего лизина
9.1.1 Определение на автоанализаторе
Массовую долю общего лизина в испытуемой пробе
Хх,
%. вычисляют по формуле
0.25 0,146- 100- 100 5,
100
,
(
1
)
где 0,25 —объем стандартного раствора лизина, нанесенный на колонку, см3;
0.146 —массовая концентрация стандартного раствора лизина, мг/см5;
100 —объем гидролизата пробы, см5;
100 —коэффициент пересчета в проценты;
5’, —площадь пика общего лизина, определяемого по 8.3.3.1, мм2;
5"„ —площадь пика лизина массой 0,25 мкмоль, мм2;
/л, —масса навески, взятой для определения общего лизина в первую колбу, г;
У„ —
объем гидролизата, перенесенного на колонку (обычно
У„
= 0,5 см3), см3;
1000 —коэффициент пересчета мг в г.
9.1.2 Определение вручную
Массовую долю общего лизина в испытуемой пробе
X,,
%. вычисляют по формуле
Ух
•0,73
Л,
100,
(
2
)
т,
Г, ■1000- Д,
4