ГОСТ Р 51416-99
6.6 Градуировочные пипетки вместимостью 1,5 и 10см3с допускаемой относительной погреш
ностью ± I
%.
6.7 Мерные колбы вместимостью 10, 20 и 100см5с допускаемой относительной погрешностью
± 0,2
%.
6.8 Весы лабораторные 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г.
7 Отбор проб
7.1 Отбор проб по ГОСТ 13496.0.
8 Проведение испытания
8.1 Подготовка проб по ГОСТ Р 51419.
8.2 Взятие навески
Две навески, взятые на весах 2-го класса точности, массой, содержащей около 100 мг сырого
протеина, помешают в две колбы (6.1). Содержание сырого протеина определяют по ГОСТ Р 51417.
8.3 Общий лизин
8.3.1 Гид разиз хлористоводородной кислотой
В колбу вместимостью 1000 см5 к навеске добавляют 500 см3 хлористоводородной кислоты
молярной концентрации с(НС1) = 6 моль/дм3. Закрывают колбу обратным холодильником и поме
щают в масляную баню, предварительно нагретую до 120—130 "С.
После медленного кипячения в течение 24 ч казбу охлаждают и содержимое фильтруют через
тигель. Фильтрат выпаривают при температуре не выше 40 ’С на ротационном испарителе. К остатку
добавляют дистиллированную воду и снова выпаривают. Эту операцию повторяют до тех пор. пока
не будет удалена хлористоводородная кислота; для этого обычно достаточно четыре обработки,
используя каждый раз по 30 см3дистиллированной воды. Остаток растворяют в буферном растворе pH
2,2 и количественно переносят в мерную казбу вместимостью 100 см3. Объем раствора доводят до
метки буферным раствором pH 2.2. Фильтруют через складчатый бумажный фильтр.
8.3.2 Заключительная подготовка колонки и хроматография гидролизата
Насос анализатора присоединяют к емкости, содержащей буферный раствор лимоннокислого
натрия с pH 5.28 (5.6). Затем его регулируют, чтобы обеспечить скорость потока жидкости 50 см3/ч.
Насос присоединяют в козонке со смолой, нагретой предварительно до 55 ‘С, и в течение 20 мин
через козонку пропускают буферный раствор, чтобы установилось равновесие. Насос отсоединяют.
Удаляют большую часть жидкости над смолой, следя при этом, чтобы поверхность смолы все время
была покрыта жидкостью.
При помощи пипетки 0,5 см3гидролизата (или 1см5, если ручная система) наносят на колонку
и пропускают его через колонку под небазьшим давлением азота. Стенки колонки обмывают 0,5 см3
буферного раствора pH 5,28 и пропускают через колонку. Колонку доверху заполняют буферным
раствором и присоединяют к насосу.
8.3.3 Определение
8.3.3.1 Автоматизированная система
Включают анализатор. Прибор градуируют по 8.3.2. используя 0,25 мкмоль лизина (0,25 см3
стандартного раствора лизина) или массу лизина, установленную в инструкции к анализатору.
8.3.3.2 Ручная система
8.3.3.2.1 Локализация лизина
Фракцию элюата. содержащую лизин, определяют, испазьзуя раствор лизина известной кон
центрации, например, I мкмоль/см3. Для этого отбрасывают первые 25—30 см5 элюата и затем
собирают в пробирки фракции по I см3до тех пор. пока не получат 50 фракцию, считая с начала
элюирования. К каждой фракции между 30 и 50 фракциями добавляют по I см5 нингидринового
реактива. Перемешивают, переносят в кипящую водяную баню и оставляют на 15 мин. Охлаждают и
разбавляют путем добавления 10 см3буферного раствора pH 5.28
П р и м е ч а н и е —Исключительно для информации: мри описанных условиях лизин обычно элюиру
ется между 39 и 45 фракциями.
8.3.3.2.2 Определение
Если лизин элюировался между 39 и 45 фракциями, отбрасывают первые 38 см3 элюата,
собирают и смешивают фракции (от 39 до 45), соответствующие пику лизина, и высушивают на
ротационном испарителе.
Пр и мс ча и и е —После получения <)>ракмий. содержащихлизин, через колонку пропускают ешс около
200 см5буферного раствора, чтобы удалить нежелательные компоненты, которые могут остаться.
3