ГОСТ 30627.6-98
количественно переносят в мерную колбу вместимостью 500 см3, доводят объем дистиллированной
водой до метки и перемешивают.
4.2.8 Приготовление водногораствора серной кислоты массовой концентрации 0,3 г/сму
170 см3 концентрированной серной кислоты плотностью 1,84 г/см3 осторожно приливают к
500 см3 дистиллированной воды в фарфоровом стакане, перемешивают, охлаждают до (20±5) ’С,
количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1000см3, доводят объем дистиллированной
водой до метки и вновь перемешивают.
4.2.9 Гидролиз
(6.00=0,01) г продукта, взвешенного на весах 4-го класса точности, растворяют в 150 см3
водного раствора соляной кислоты молярной концентрации с (НС1) = 0,1 моль/дм3 в конической
колбе вместимостью 250 см3 и кипятят на водяной бане (40±1) мин.
Параллельно готовят холостую пробу на содержание рибофлавина в ферментных препаратах,
используя те же количества ферментных препаратов и реактивов.
Затем колбы охлаждают до (20±5) *С, доводят активную кислотность гидролизатов до pH =
= 4,5 с помощью насыщенного раствора уксуснокислого натрия (5—7 см3), добавляют (0,10±0,()1) г
амилоризина или пектофоэтиднна, взвешенных на весах 4-го класса точности, приливают 0.5 см3
толуола и выдерживают в термостате 14—16 ч при (37±1) *С.
Полученные гидролизаты охлаждают до (20±5) *С, переносят в мерную колбу вместимостью
250 см3, доводят объем до метки дистиллированной водой и фильтруют.
Если есть необходимость прервать анализ на 1—2 дня. то перед доведением объема до 250 см3
гидролизаты кипятят 5 мин на водяной бане.
До проведения измерений фильтраты хранят в плотно закрытых колбах в темном месте при
(6±2) "С.
4.2.10 Окисление примесей
Вконическую колбу вместимостью 250 см3 вносят 100 см3 фильтрата, вдругую такую же колбу
вносят 100 см3холостой пробы, приготовленной по 4.2.9. В обе колбы добавляют по 2 см3раствора
серной кислоты массовой концентрации 0,3 г/с.м3и изпипетки по каплям добавляют водный раствор
перманганата калия массовой концентрации 0,03 г/см3, постоянно перемешивая, до получения
малинового окрашивания, не исчезающего 20 с.
Через I мин избыток перманганата калия удаляют добавлением по каплям раствора перекиси
водорода массовой концентрации 0,03 г/см3. Израсходованные объемы растворов перманганата и
перекиси водорода приплюсовывают к первоначально взятому на окисление объему фильтрата,
чтобы определить конечный объем раствора.
Полученный раствор переносят в делительную воронку, добавляют 30—50 см3 хлороформа и
осторожно встряхивают 1 мин, избегая образования эмульсии.
После разделения слоев нижний хлороформепный слой отбрасывают, а верхний (водная фаза)
используют для дальнейшего определения.
4.2.11 Фотами
В четыре конические колбы вместимостью 100 см3 вносят по 20 см3 анализируемого образца,
полученного по 4.2.10. Вдве из них добавляют по 2 см3рабочегостандартного раствора рибофлавина
массовой концентрации 1мкг/см3. В пятую коническую колбу вместимостью 100 см3вносят 20 см3
холостой пробы. Во все колбы добавляют по 4 см3 водного раствора гидроокиси натрия
молярной концентрации 7 моль/дм3, закрывают пробками, перемешивают и облучают их 40 мин
светом двух настольных ламп по НИ) Втс расстояния 30 см при температуре окружающего воздуха
(20±5) *С. Во избежание перегревания проб используют настольный вентилятор.
Немедленно после окончания облучения все растворы подкисляют 4 см3 ледяной уксусной
кислоты, добааляют по 20 см3хлороформа, закрывают притертыми пробками и встряхипают колбы
2 мин, избегая образования эмульсии.
Оставляют все колбы на (12±2) мин для расслоения водной и хлороформенной фаз.
Пипеткой с резиновой грушей или небольшой делительной воронкой отбирают 10—12 см3
хлорофор.менного раствора и фильтруют в отдельную сухую пробирку через слой безводного
сернокислого натрия 20—30 г.
4.3 П р о в е д е н и е и з м е р е н и й
Измеряют флюоресценцию полученных хлороформенных растворов на флюорометре со све
тофильтрами, используемыми для витамина В,, имеющими максимум пропускания в области от 350
до 480 нм <В2 —первичный) и от 510 до 650 им (В2—вторичный).
4