ГОСТ 34812—2021
Выход личинок из цист и их жизнеспособность контролируют под биологическим микроскопом.
Отсутствие в течение 30 мин любых признаков двигательной активности или пожелтение метацеркария
свидетельствует о гибели личинок.
8.3.2Отобранные личинки нематод из мороженой, подкопченной или копченой пищевой рыбной
продукции инкубируют в термостате при температуре 37 °С в физиологическом растворе по 7.1.1 или
растворе трипсина по 7.1.3 в течение трех дней, ежедневно проверяя их жизнеспособность в соответ ствии
с 8.1.
8.4 Метод флюоресценции (с использованием ультрафиолетового света)
Метод применим к личинкам нематод и трематод.
8.4.1 При просмотре необходимо использовать защитные (синие) очки.
8.4.2 Мышечную ткань или мантию моллюсков толщиной от 1,0 до 1,5 см сжимают между стекла
ми до толщины 1 мм и облучают ультрафиолетовым светом с двух сторон.
8.4.3 Жизнеспособность личинок фиксируют по изменению цвета. Особенно интенсивно флюо
ресцируют мертвые гельминты в пищевой рыбной продукции, подвергнутой замораживанию. Характер
свечения у разных видов не одинаков: личинки р. Anisakis имеют голубовато-белую флюоресценцию
(бледную у живых и яркую у мертвых); личинки р. Contracaecum — от бледной (у живых) до ярко-желтой (у
мертвых).
Живые личинки имеют слабо выраженную флюоресценцию. Мертвые личинки дают яркое свече
ние.
8.5 Метод окрашивания (с использованием витальных красителей)
Метод применим к личинкам нематод, цестод и скребней.
8.5.1 Отобранные личинки нематод, цестод и скребней помещают на предметное стекло с кап
лей раствора метиленового синего по 7.1.9. Препарат накрывают покровным стеклом, которое плотно
прижимают к предметному стеклу при легком постукивании препаровальной иглой. Под микроскопом
наблюдают степень окрашиваемости личинок. Жизнеспособные личинки не окрашиваются. Мертвые
личинки окрашиваются в синий цвет частично или полностью.
8.5.2 Отобранные личинки цестод (плероцеркоидов или процеркоидов) помещают в чашку Петри
(или часовое стекло) и окрашивают водным раствором нейтрального красного по 7.1.8 от 5 до 20 мин.
Для определения жизнеспособности личинки извлекают из окрашивающего раствора, помещают в
чис тый физиологический раствор.
Степень окрашивания контролируют под биологическим микроскопом. Живые личинки приобре
тают стойкую розовую окраску. Для контроля личинок извлекают из краски, помещают в чистый физио
логический раствор и в нем просматривают степень окрашивания. Мертвые личинки не окрашиваются.
8.5.3 Для определения жизнеспособности личинок трематод (метацеркарий), на кусочки мышечной
ткани с личинками наносят две капли раствора розоловой кислоты (аурина) по 7.1.6 и через 2 мин две
капли 0,1 N раствора гидроокиси калия по 7.1.10. Избыток жидкости удаляют фильтровальной бумагой.
Подготовленную пробу накрывают покровным стеклом и просматривают в биологический микроскоп.
Мышечная ткань и мертвые личинки окрашиваются в розовый цвет, живые личинки не окрашиваются.
8.6 Метод переваривания и физического раздражения
Метод применим к личинкам нематод.
8.6.1 Для выделения личинок нематод из мышечной ткани отбирают (200 ± 10) г филе, измельчают
вручную или на мясорубке и помещают в емкость (стакан) вместимостью не менее 2000 см3, содержа
щую 1000 см3 раствора пепсина по 8.1.4. Смесь подогревают и прогревают на магнитной мешалке при
температуре от 35 °С до 37 °С в течение 1—2 ч при постоянном медленном помешивании. Если мышеч
ные ткани не растворились, то раствор процеживают через сито по 6.1, промывают водой и оставшиеся
нерастворившиеся ткани переносят в стакан. В стакан добавляют 700 см3 раствора пепсина и смесь
вновь подогревают на магнитной мешалке при температуре от 35 °С до 37 °С при постоянном медлен ном
помешивании до исчезновения крупных кусков мышечной ткани. Раствор процеживают через сито, а
содержимое сита промывают водой.
8.6.2 Жизнеспособность отобранных личинок определяют методом физического раздражения
по 8.1.
7