ГОСТ Р 57244—2016
- цилиндры мерные вместимостью 100 см3по ГОСТ 1770;
- ступка фарфоровая по ГОСТ 9147;
- бумага хроматографическая по [3J;
- мензурки стеклянные вместимостью 50 см3по ГОСТ 1770;
- воронки диаметром 36. 56 мм. высотой 80 мм по ГОСТ 25336;
- циркуль по ГОСТ 28950;
- ножницы по ГОСТ 21239;
- линейка по ГОСТ 14735;
- лоток стеклянный из оргстекла или чашки Петри по ГОСТ 25336;
- кислота соляная по ГОСТ 3118, растворы концентраций 0.01 и 0.2 моль/дм3:
- кислота уксусная по ГОСТ 61;
- бутанол-1 по ГОСТ 6006;
- спирт этиловый по ГОСТ Р 55878 или по ГОСТ 5962;
- пиридин по ГОСТ 13647;
- нингидрин. 0,25%-ный раствор в этаноле, содержащем 1% уксусной кислоты;
- гризина стандартный образец, раствор с активностью 1000 ЕД в 1см3в соляной кислоте концен
трации 0.01 моль/дм3.
5.6.2 Подготовка к испытанию
5.6.2.1 Приготовление испытуемой пробы
5 г препарата помещают в ступку и растирают при добавлении 25 см3 раствора соляной кислоты
концентрации 0.2 моль/дм3. Суспензию переносят в колбу, ступку обмывают 25 см3 раствора соляной
кислоты концентрации 0.2 моль/дм3и также сливают в колбу. Колбу закрывают пробкой, ставят на аппа
рат для встряхивания на 30 мин. Затем содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр.
Фильтрат используют для проведения испытания.
5.6.2.2 Подготовка хроматографической камеры
В камеру или эксикатор ставят стаканчик со смесью растворителей, состоящей из бутанола-1,
пиридина, уксусной кислоты и воды в соотношении 15:10:3:12. На дно камеры кладут фильтровальную
бумагу, смоченную этой же смесью.
5.6.2.3 Подготовка хроматографической бумаги
Из листа хроматографической бумаги вырезают круги диаметром 28—32 см (в зависимости от
размера камеры). Из центра круга циркулем проводят окружность радиусом 2 см. Круг делят на шесть
разных секторов, в центре круга делают отверстие диаметром 0.5 см для фитиля, который скручивают из
кусочка фильтровальной бумаги.
5.6.2.4 Подготовка газона для биоавтографии
В стеклянный лоток наливают 100 см3 голодной агаровой среды и 80 см3 питательной агаровой
среды с тест-культурой Вас. subtilis 6633.
5.6.3 Проведение испытания
5.6.3.1 На два противоположных сектора круга (на отрезок дуги внутренней окружности) микро
пипеткой наносят раствор стандартного образца гризина в соляной кислоте концентрации 0,01 моль/
дм3 в количестве 0.1 см3. Таким же образом наносят растворы двух испытуемых проб. Для кормогри-
зина-40 объем наносимой пробы составляет 0.025 см3, для кормогризина-10 — 0.1 см3. При нанесении
проб хроматограммы периодически просушивают феном. После нанесения проб в отверстие в центре
диска вставляют фитиль и хроматограмму помещают в камеру так, чтобы фитиль был погружен в рас
творитель.
Для лучшего разделения компонентов гризинового комплекса хроматографирование проводят в
течение 15— 16 ч. После окончания процесса хроматограмму вынимают из камеры и высушивают в вы
тяжном шкафу. Затем хроматограмму разрезают по диаметру на две части, так чтобы в каждой из них
был сектор со стандартным образцом и секторы с двумя исследуемыми образцами.
5.6.3.2 Одну половину хроматограммы проявляют биоавтографическим способом, для чего из
каждого сектора хроматограммы в радиальном направлении вырезают полоски шириной 0.5 см и на
кладывают их на газон с тест-культурой параллельно одна другой на расстоянии 2 см. совмещая их
стартовую линию. На обратной стороне лотка отмечают стартовую линию и положение каждой полоски.
Через 3—5 мин полоски снимают пинцетом.
Лоток с газоном помещают в термостат с температурой 37 СС на 18-20 ч.
10