ГОСТ Р 57244—2016
Для каждой концентрации рассчитывают среднее арифметическое диаметров зон задержки роста
по 3 чашкам. Для контрольной концентрации подсчитывают среднее арифметическое диаметров зон
задержки роста отдельно по 3 чашкам и по всем 15 чашкам, находят поправку, которая
представляет собой разность между средними арифметическими контрольных зон задержки роста,
вычисленных по 15 и по 3 чашкам.
Полученные поправки прибавляют к средним значениям диаметра зон задержки роста стандарт
ных растворов концентрации 1.8; 2,4; 3.0: 3.8; 4,5 ЕД в 1 см3, вычисленных по 3 чашкам.
По полученным данным на полулогарифмической сетке строят градуировочный график. На ось
абсцисс наносят средние значения диаметра зон задержки роста стандартных растворов, полученных
после внесения поправки, а также среднее значениедиаметра зоны контрольного раствора, вычислен
ное по всем 15 чашкам. На оси ординат наносят соответствующие концентрации растворов.
Градуировочным графиком пользуются в течение двух месяцев, периодически проверяя угол на
клона кривой по двум концентрациям на 3-5 чашках.
5.5.3 Проведение испытания
На каждую пробу испытуемого препарата используют но менее 3 чашек.
Капельницей в три лунки каждой из чашек вносят рабочий стандартный раствор, а в три другие
лунки — один из растворов испытуемого препарата. Объем вносимых растворов рабочего стандартного
раствора и испытуемого препарата должен быть равным и составлять около 0.1 см3. Чашки выдержи
вают в течение 16-18 ч в термостате при температуре 37 °С. затем измеряют диаметр зон задержки
роста тест-культуры. При этом в расчет берут одну концентрацию, при которой диаметр зоны роста
тест-культуры в испытуемых образцах ближе к диаметру зон задержки стандартного раствора.
5.5.4 Обработка результатов
Измеряют зоны задержки роста тест-культуры, образуемые контрольным раствором стандарта и
испытуемым раствором. Находят среднее арифметическое результатов диаметра зон задержки роста
по 3 чашкам. Вычитают разность значений диаметров зон задержки роста контрольной концентрации
стандартной кривой и контрольной концентрации в испытании. Эту разность прибавляют к среднему
значению диаметра зон задержки испытуемого раствора препарата, если она положительная, или вы
читают. если она отрицательная.
Затем по кривой находят концентрацию, соответствующую найаенной величине зон. Умножая по
лученную концентрацию на степень разбавления, получают содержание антибиотика в ЕД в 1 см3.
1 условная ЕД гризина соответствует 1 мкг антибиотика в товарном препарате.
Содержание гризина (Х4) в г в 1 кг препарата определяют по формуле
N- V
т7■103
(4)
где N — содержание гризина в испытуемом растворе, мкг/см3;
V— объем соляной кислоты, используемой для приготовления взвеси препарата, см3;
т7— навеска препарата, г,
103— переводной коэффициент мкг/г в г/кг.
За результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных
определений, которые не должны отличаться от среднего значения более чем на 10 % (отн.).
5.6 Определение подлинности (идентичности)
Сущность метода заключается в хроматографическом разделении на бумаге гризина на компо
ненты и проявлении хроматограммы нингидриновым красителем и биоавтографическим методом и по
следующем сравнении полученной хроматограммы с хроматограммой стандартного образца гризина.
проявленной аналогичным способом.
5.6.1 Аппаратура, материалы, реактивы, растворы:
- весы лабораторные общего назначения по ГОСТ Р 53228, 1-го и 2-го классов точности с наи
большим пределом взвешивания 200 г;
- аппарат для встряхивания жидкостей;
- камера или эксикатор для хроматографии диаметром 28-32 см;
- электровентилятор бытовой по ГОСТ 7402 или электрофен бытовой по ГОСТ 22314;
- пипетка исполнения 8. 2-го класса точности вместимостью 0,1 см3по (4);
- колбы конические вместимостью 100 см3по ГОСТ 25336:
9