ГОСТ ISO 17372—2016
3 Сущность метода
Анализируемую пробу экстрагируют ацетонитрилом, разбавленным водой, и фильтруют. Затем
аликвоту фильтрата разбавляют водой или солевым фосфатным буфером (далее — ФБС) и очищают на
иммуноаффинной колонке (далее — ИАК). Очищенные экстракты анализируют методом обращен-но-
фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ) с флуориметрическим детекти
рованием. Присутствие зеараленона в пробе может быть подтверждено оценкой отношения величин
эмиссии при возбуждении на двух длинах волн (236 и 274 нм), либо с использованием нормально-фа
зовой ВЭЖХ. либо применением диодно-матричного детектора.
4 Реактивы
Используют реактивы только признанной аналитической чистоты, если не указано иначе.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ — Работы со всеми реактивами проводят в вытяжном шкафу. Используют защит
ные очки и защитную одежду, избегая контакта реактивов с кожей.
4.1 Вода 1-й степени чистоты по ISO 3696.
4.2 Ацетонитрил (CH3CN )для ВЭЖХ.
4.3 Метанол (СН3ОН) для ВЭЖХ.
4.4 Хлористый натрий (NaCI) массовой долей основного вещества не менее 99%.
4.5 Экстрагирующий растворитель объемной долей ацетонитрила ф(CH3CN) = 90 %.
Смешивают 900 см3ацетонитрила (4.2) с 100 см3воды (4.1). Тщательно перемешивают.
4.6 Разбавленный ацетонитрил объемной долей ф(CH3CN) = 50%.
Смешивают один объем ацетонитрила (4.2) с одним объемом воды (4.1). Хорошо перемешивают.
Раствор используется в случае применения автосамплера.
4.7 Разбавленный метанол объемной долей ф(СН3ОН) = 30 %.
Смешивают 75 см3 метанола (4.3) с 175 см3 воды (4.1). Тщательно перемешивают.
4.8 Двузамещонный фосфорнокислый натрий (Na2HP04) массовой долей основного вещества
не менее 99 %.
4.9 Однозамещемный фосфорнокислый калий (КН2Р04) массовой долей основного вещества
не менее 99 %.
4.10 Хлористый калий (КС!) массовой долей основного вещества не менее 99 %.
4.11 Гидроксид натрия (NaOH) массовой долей основного вещества не менее 99 %.
4.12 Соловой фосфатный буфер (ФСБ)
Растворяют в 1 дм3 воды (4.1) 8 г хлористого натрия (4.4). 1.16 г двузамещенного фосфорнокис
лого натрия (4.8). 0.2 г однозамещенного фосфорнокислого калия (4.9) и 0,2 г хлористого калия (4.10).
Устанавливают значение pH 7,4 ед. pH с помощью раствора гидроксида натрия (4.13). Допускается ис
пользование готового концентрированного ФБС. разбавленного перед использованием.
4.13 Раствор гидроксида натрия, с (NaOH) = 0.2 моль/дм3
Растворяют 8 г гидроксида натрия (4.11) в 1 дм3 воды.
4.14 Подвижная фаза для ВЭЖХ
Помещают 460 см3 ацетонитрила (4.2) в колбу вместимостью 1 дм3, добавляют 460 см3воды (4.1)
и 80 см3 метанола (4.3). Тщательно перемешивают и фильтруют через фильтр (5.13).
4.15 Основной стандартный раствор зеараленона с номинальным значением массовой
концентрации 50 мкг/см3
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ — Зеараленон — микотоксин, обладающий эстрогенным действием. При обраще
нии с ним следует учитывать его биологическую активность.
Взвешивают 5,0 мг зеараленона с точностью ±0.1 мг. Помещают в мерную колбу вместимостью
100 см3 (5.1.2). Растворяют в ацетонитриле (4.2) и доводят раствор до метки этим же растворителем.
Фактическое значение массовой концентрации зеараленона в основном стандартном растворе
определяют следующим образом.
Отбирают пипеткой (5.1.3) 4.0 см3 основного стандартного раствора зеараленона. переносят в
мерную колбу вместимостью 25 см3 (5.1.2), доводят до метки ацетонитрилом (номинальное значение
массовой концентрации зеараленона в полученном растворе 8 мкг/см3).
2