ГОСТ ISO 17372—2016
Объем вводимой пробы — 100 мм3.
Колонка — см. 5.15.3, с предохранительной колонкой (стационарная фаза С1а).
Рабочие длины волн детектора — возбуждение 274 нм. регистрация — 440 нм (для детектора с
переменной длиной волны) или 418 нм (для фильтрового детектора).
8.4.2 Контроль пригодности системы
8.4.2.1 Разрешение
Вводят ВЭЖХ стандартный раствор (4.17.4) массовой концентрации 0.050 мкг/см3. Должен быть
получен единственный пик. Однако, если имеется соседний пик, пик зеараленона должен быть разре
шен до базовой линии.
8.4.2.2 Фактор размывания пика
Фактор размывания пика Фармакопеи Соединенных Штатов Америки, численно равный коэффи
циенту асимметрии пика F Европейской Фармакопеи, должен быть менее 1.6.
8.4.3 Проведение хроматографического анализа
8.4.3.1 Вводят 100 мм3 (полная петля) стандартного раствора ВЭЖХ массовой концентрации
0,020 мкг/см3(4.17.5). Выполняют два или более ввода стандартных растворов, обеспечивая повторяе
мость площади пика не более 2 %.
Определяют линейность градуировочной характеристики — зависимости значения площади пика
от концентрации зеараленона (мкг/см3), для чего вводят в хроматограф 100 мм3(полная петля) каждого
стандартного раствора для градуировки (4.17). Коэффициент корреляции должен быть не менее 0,999
и при 95 %-ном доверительном интервале градуировочная кривая должна проходить через начало ко
ординат.
8.4.3.2 Вводят 100 мм3анализируемых растворов. После окончания ввода партии анализируемых
растворов вводят пять стандартных растворов (4.17) и усредняют площади пиков с данными, получен
ными по 8.4.3.1 для построения градуировочного графика. Для контроля дрейфа после ввода серии из
пяти — восьми анализируемых растворов вводят 100 мм3 стандартного раствора. Если площадь пика
анализируемого раствора превышает площадь пика от градуировочного раствора максимальной кон
центрации. анализируемый раствор разбавляют.
8.4.3.3 Если массовая доля зеараленона в анализируемой пробе превышает 3 мг/кг. во избежание
перегрузки ИАК анализируемый экстракт (8.2) разбавляют в 10 раз экстрагирующим растворителем
(4.5), затем повторяют процедуры, установленные в 8.3.
8.4.3.4 Присутствие зеараленона в потенциально положительных пробах подтверждаются ис
пользованием длины волны возбуждения 236 нм (будет наблюдаться повышение чувствительности)
или применением диодно-матричного детектора. Используют любой метод, установленный в 8.4.3.5,
8.4.3.6 или 8.4.3.7.
8.4.3.5 В случае использования флуоресцентного детектора с дейтериевой лампой используют
анализируемые растворы по 8.3.1.7 или 8.3.2.8. Регулируют диапазон детектора или ослабляют инте
гратор для получения схожего отклика пика как в 8.4.3.1. Идентичность подтверждается, если отноше ние
площадей пиков при 236 нм и 274 нм постоянно и не различается для стандартного и анализируе мого
растворов. Отношения площадей пиков анализируемых растворов должны быть в пределах 5 %
отношений для соответствующих стандартных растворов.
8.4.3.6 Если применяется детектор флуоресценции с ксеноновой искровой лампой, определение
отношения пиков при обращенно-фазовой хроматографии может оказаться невозможным, поскольку
интенсивность лампы слишком низка при 236 нм. Проверяют возможность применения для данного
детектора процедуры по 8.4.3.4.1; если это невозможно, то присутствие зеараленона подтвержда ют
используя метод нормально-фазовой хроматографии (см. приложение А). Анализ пробы (проб) и
контрольной пробы повторяют вновь, начиная с пункта 8.3. но при выпаривании элюата зеараленона
(8.3.1.7 или 8.3.2.8) добавляют 2,0 см3 смеси хлороформа, гексана и изопропанола, в объемном отно
шении 50 ♦ 50 + 3. соответственно (А.1.2). Далее анализ продолжают согласно А.З, используя колонку для
ВЭЖХ. заполненную силикагелем (см. А.2).
8.4.3.7 Если приме(4яется диодно-матричный детектор, используют анализируемые растворы по
8.3.1.7 или 8.3.2.8. Регистрируют спектр (от 200 до 400 нм) пика со временем удерживания зеаралено на
и сравнивают со спектром стандартного раствора. Должны быть видны три максимума поглощения (236.
274 и 316 нм) и относительные интенсивности пиков должны быть подобными для анализируемо го и
стандартного растворов. Максимум пика пробы должен находиться в пределах ± 2 нм от максимума пика
стандарта. Пороговое значение коэффициента общности более 950 из 1 000 для спектров пиков также
подтверждает присутствие зеараленона.
7