ГОСТ Р 57201—2016
- глюкоза — 2 г;
- натрий хлористый — 0,5 г;
- натрий азотистокислый — 0.5 г или калий цианистый — 0.02 %-ный раствор — 5 см3;
- вода дистиллированная — до 1000 см3.
В колбу вместимостью 1000 см3наливают дистиллированную воду и последовательно растворя
ют в ней все компоненты. Затем доводят содержимое колбы дистиллированной водой до метки. Конеч
ное значение pH среды устанавливают 6.8—7.0.
5.5.2.4 Приготовление посевной культуры
Посевную культуру готовят за сутки до постановки опыта. Для этого пробирки с 10 см3 основной
среды и витамином В,2 (из расчета 0,025 мкг в 1 см3 среды) или dl метионином (из расчета 1 мкг в
1см3среды) стерилизуют в автоклаве при 1кгс/см2в течение 20 мин и после охлаждения петлей вносят
культуру с агаровой среды.
Пробирки выдерживают в термостате 16—20 ч при температуре 37 °С. Полученную бактериаль
ную суспензию разводят стерильным 0.9 %-ным раствором хлористого натрия или стерильной основ
ной средой, разбавленной вдвое стерильной дистиллированной водой в соотношении одна капля су
спензии на 10 см3раствора или среды.
5.5.2.5 Приготовление разведений стандартного раствора витамина В,2
Перед приготовлением стандартного раствора витамина В,2 определяют его содержание в кри
сталлическом цианкобаламине или в его растворе на спектрофотометре.
Для этого около 0.1 г кристаллического цианкобаламина. взвешенного с погрешностью не более
0.0001 г. растворяют в бидистиллированной водо в мерной колбе вместимостью 500 см3и доводят объ ем
раствора до метки.
25 см3 полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3и доводят объем
раствора бидистиллированной водой до метки. Оптическую плотность определяют на спектрофотоме
тре при длине волны 361 нм в кювете с толщиной слоя 1см.
Массовую долю цианкобаламина (X) в процентах вычисляют по формуле 1
0*500-10
Х ~207 х m
(
1
)
где D — оптическая плотность испытуемого раствора:
207 — удельный показатель поглощения Е’ *мчистого безводного цианкобаламина при длине волны
361 нм;
т — масса навески, г.
Раствор цианкобаламина из ампулы разводят бидистиллированной водой до содержания около
0.02 мг цианкобаламина в 1см3, измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофо
тометре при длине волны 361 нм в кювете с толщиной слоя 1 см.
В качестве контрольного раствора применяют бидистиллированную воду. Содержание цианкоба
ламина (X,) в мг в см3вычисляют по формуле 2
Ох 10 х V,
207 ■V’<2>
где V, — конечный объем раствора, см3,
V — объем раствора цианкобаламина. взятый для разведения, см3.
Стандартный раствор готовят из расчета 10 мкг витамина В,2на 1см3бедистиллированной воды.
Раствор хранят в холодильнике в темной стеклянной посуде с притертой пробкой под слоем толу
ола в течение месяца. По истечении срока хранения раствор подлежит проверке на спектрофотометре
по методике для раствора цианкобаламина.
В день опыта раствор разводят в 2x105раз (последовательно в 100.100. а затем в 20 раз). Затем
из этого разведения готовят четыре рабочих разведения и одно контрольное. Каждое из них готовят в
трех повторностях, для чего в 15 пробирок (по три для каждого разведения и контроля) пипеткой
вносят по 5 см3 основной среды и следующие количества раствора витамина В12: 0.0; 0,5; 1.0; 1.5;
2.0 см3. Затем объем содержимого каждой пробирки доводят до 10 см3добавлением
дистиллированной воды.
5.5.2.6 Подготовка исследуемой пробы кормового витамина В12для анализа
Навеску препарата массой 1 г, взвешенную с погрешностью не более 0.0001 г, измельчают и су
спензируют в 50 см3дистиллированной воды. Для стабилизациидобавляют 0.05—0,10 газотистокисло го
натрия или 1—2 см3 0.02 %-ного раствора цианистого калия и несколькими каплями 1н. соляной кис лоты
доводят pH суспензии до 5,0—5,5. Избыток кислоты нейтрализуют 0.5 н. раствором едкого натра.
6