ГОСТ Р 57201—2016
- уголь активированный марки «Бау» по ГОСТ 6217;
- толуол по ГОСТ 5789;
- калий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 4198;
- натрий лимоннокислый трехзамещенный по ГОСТ 22280;
- аммоний сернокислый по ГОСТ 3769;
- глюкозу по ГОСТ 6038;
- натрий хлористый по ГОСТ 4233;
- натрий азотнокислый по ГОСТ 4197 или калий цианистый технический по ГОСТ 8465;
- dl метионин;
- бумагу фильтровальную лабораторную по ГОСТ 12026,
- спектрофотометр СФ-26 или других аналогичных марок.
5.5.2 Подготовка к испытанию
5.5.2.1 Приготовление 10 %-ного казеинового кислотного гидролизата:
- 100 г размолотого казеина, взвешенного с погрешностью не более 0.01 г. помещают в колбу вме
стимостью 1000 см3, добавляют 500 см320 %-ной соляной кислоты и перемешивают.
К колбе присоединяют обратный холодильник и нагревают в течение 24 ч. Первые 5—8 ч нагрева
ние проводят на водяной бане при температуре 100 °С. а затем на плитке с асбестовой сеткой.
Из полученного гидролизата под вакуумом отгоняют соляную кислоту до получения густого сиро
па. Затем добавляют 300 см3дистиллированной воды и снова отгоняют до получения густого сиропа.
Указанную операцию повторяют еще раз.
Оставшуюся массу растворяют в 100 см3 дистиллированной воды, доводят pH до 3.5 5 н. раство
ром едкого натра, помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см3 и доливают до метки дистилли
рованной водой.
Добавляют 20 см3 активированного угля и периодически встряхивают втечение 1ч. затем полученную
смесь фильтруют на воронке Бюхнера. Фильтрат еще раз обрабатывают углем до получения бесцветного
или слабо-желтого раствора, который разливают в колбы вместимостью до 100 см3и стерилизуют в авто
клаве при 1кгс/см2в течение 20 мин изатем охлаждают. Раствор хранят в холодильнике подслоем толуола.
5.5.2 2 Выращивание чистой культуры Е. coil штамм 113-3
Культуру выращивают в пробирках на агаровых косяках и хранят в холодильнике при температуре
3—5 °С.
Состав агаровой среды в расчете на 100 см3:
- казеиновый кислотный 10 %-мый гидролизат — 6 см3;
- калий фосфорнокислый двузамещенный — 20 мг.
- железо сернокислое — 0,5 мг;
- магний сернокислый — 20 мг;
- аспарагин — 20 мг.
- глицерин — 200 мг:
- агар — 1.5 г.
- витамин В12— 10 мкг:
- вода дистиллированная — до 100 см3.
В колбу вместимостью 100 см3наливают дистиллированную воду и последовательно растворяют
в ней первые четыре компонента.
Аспарагин отдельно растворяют в дистиллированной воде с прибавлением нескольких капель 1 н.
соляной кислоты, а затем приливают к раствору в колбе. 1 н. раствором едкого натра доводят pH рас
твора до 7,0. Избыток щелочи нейтрализуют 1 н. раствором соляной кислоты.
К раствору добавляют глицерин, агар и доливают дистиллированной водой до метки. Затем колбу с
содержимым подогревают на водяной бане до растворения агара, вносят витамин В12и смесь тщательно
перемешивают. Смесь разливают по 5 см3в пробирки и стерилизуют 15 мин под давлением 1 кгс/см2.
Культуру раз в месяц пересевают на свежую агаровую среду и выдерживают в термостате в тече
ние 24 ч при температуре 37 °С.
5.5.2.3 Приготовление основной среды
Состав среды в расчете на 1000 см3:
- калий фосфорнокислый двузамещенный — 7 г;
- калий фосфорнокислый однозамещенный — 3 г;
- натрий лимоннокислый — 0,5 г:
- магний сернокислый — 0.1 г:
- аммоний сернокислый — 1 г
5