ГОСТ 23231— 2016
5 см3полученного раствора отбирают в мерную колбу вместимостью 500 см3,цилиндром добав
ляют 300 см3дистиллированной воды и 25 гкристаллической трихлоруксусной кислоты. После раство
рения содержимое колбы доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.
Полученный основной раствор содержит 20 мкг фенола в 1см3.
Для построения градуировочного графика готовят три основных раствора.
8.2 Построение градуировочного графика
8.2.1 Приготовление градуировочных растворов
В пробиркивносятследующие объемы основного раствора 0(контрольнаяпробирка),0.25.0.5.1.0,
1.5и2.0см3,чтосоответствуетмассе фенола в пробирках0(контрольная пробирка). 5.10.20.30и 40мкг.
Доводят объем в каждой пробирке до 2.5 см3 раствором трихлоруксусной кислоты массовой кон
центрации 50 г/дм3, добавляя соответственно 2.5. 2.25. 2,0.1.5.1.0. 0.5 см3.
8.2.2 В каждую пробирку добавляют 5 см3раствора гидроокиси натрия молярной концентрации
0.5 моль/дм3, перемешивают и выдерживают при температуре (20 ± 2) X в течение 10 мин. Затем
добавляют 1,5см3реактива Фолина. разведенногодистиллированной водой в соотношении 1:2. иснова
перемешивают.
Через 30 мин измеряют оптическую плотность растворов по отношению краствору трихлоруксус
ной кислоты массовой концентрации 50 г/дм3на спектрофотометре или фотоэлектроколориметре со
светофильтром при длине волны (630 ± 2) нм в стеклянной кювете с толщиной поглощающего
свет слоя 10мм.
8.2.3 По полученным средним данным из трех основных растворов строят градуировочный
график. На оси абсцисс откладывают массовую концентрацию фенола (в мкг), на оси ординат — соот
ветствующее значение оптической плотности (D). Градуировочный график должен проходить через
начало координат.
Пример градуировочного графика приведен в приложении А.
9 Проведение испытания
9.1 В две пробирки (контрольную иопытную)помещают по 1гподготовленной пробы, взвешенной
с точностью до третьего десятичного знака, добавляют по 10 см3цитратного буфера, перемешивают
стеклянной палочкой и выдерживают при комнатной температуре в течение 20 мин. периодически
перемешивая.
9.2 В контрольную пробирку добавляют 5 см3 раствора трихлоруксусной кислоты массовой
концентрации200г/дм3,перемешивают,добавляют 5см3растворадинатриевой солифенилфосфорной
кислоты массовой концентрации 2 г/дм3, выдерживают 1 ч 10 мин при комнатной температуре и
фильтруют.
9.3 В опытную пробиркудобавляют 5 см3раствора динатриевой соли фенилфосфорной кислоты
массовой концентрации 2 г/дм3, перемешивают и помещают в ультратермостат при температуре
(39
1
1) вС на 1 ч. Затем добавляют 5 см3раствора трихлоруксусной кислоты массовой концентрации
200 г/дм3, выдерживают 10 мин при температуре (20 i2 ) ’С и фильтруют через воронку с бумажным
фильтром.
9.4 Для проведения цветной реакции из контрольной и опытной пробирок отбирают по 2.5 см3
безбелкового фильтрата. Цветную реакцию и последующее фотометрическое измерение интенсив
ности окраски пробы проводят по 8.2.2.
9.5 По градуировочному графику находят массовую концентрацию фенола по разности плот
ностей в контрольной и опытной пробирках.
9.6 Для проверки выполнения условий повторяемости (сходимости) проводят два единичных
измерения в соответствии с 9.1— 9.5.
10 Обработка результатов
10.1Величину активности кислой фосфатазы, выраженную массовой долей фенолах. %. вычис
ляют по формуле
Y _ С -20100
(
1
)
~ т - 2 5 10“’
где С — массовая концентрация фенола, найденная по градуировочному графикуи соответствующая
оптической плотности, найденной по разности плотностей в опытной и контрольной пробирках
(D, - 0 2).
м
кг
:
5