ГОСТ 33536—2015
7 Сущность метода определения количества мезофильных аэробных и
факультативно-анаэробных микроорганизмов
Метод основан на высеве в агаризовамную питательную среду определенного количества
продукта или его разведения, аэробном культивировании посевов при температуре (30
±
1)®С в
течение (72
±
3) ч, подсчете всех выросших видимых колоний и определении количества
мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов в 1 г продукта.
8 Методопределенияколичествамезофильныхаэробныхи
факультативно-анаэробных микроорганизмов
8.1 Отбор и подготовка проб по ГОСТ 32751, ГОСТ 26669.
8.2 Из анализируемой пробы продукта готовят исходное и ряд десятикратных разведений по
ГОСТ 26669 так, чтобы можно было определить предполагаемое количество мезофильных аэробных и
факультативно-анаэробных микроорганизмов в 1 г анализируемого продукта.
8.3 Из каждого последовательного разведения суспензию анализируемой пробы по 1 см3
высеивают в чашку Петри, используя одну чашку на каждое разведение. В каждую чашку Петри с
посевным материалом не позднее чем через 15 мин добавляют по (18
±
2) см3 одной из
агаризованных расплавленных и охлажденных до температуры (45
±
1) °С питательных сред по 6.3.
Для переноса материала из каждого разведения используют отдельную стерильную пипетку,
кроме случаев, когда работу ведут от самого большого разведения к самому малому. Чашка Петри
должна иметь маркировку с указанием номера пробы, разведения, даты и другой необходимой
информации.
8.4 Среду немедленно равномерно перемешивают с посевным материалом круговыми
движениями чашки так. чтобы среда не вытекла из чашки и не загрязняла крышку. Закрытые чашки
Петри с посевами расставляют на горизонтальной поверхности до полного застывания питательной
среды.
8.5 Для предотвращения роста микроорганизмов, образующих сплошной газон на поверхности
питательнойсреды —ползучийрост,применяют специальныемероприятияпо 8.5.1,
ограничивающие рост таких микроорганизмов.
8.5.1 На поверхность застывшей питательной среды с посевным материалом наливают 3—5 см3
расплавленного и охлажденного до (45
±
1)°С голодного (водного) агара по ГОСТ 27543 или агара
идентичного питательной среде, которая используется для испытаний.
8.5.2 Поверхность чашки Петри с посевным материалом и застывшей питательной средой
подсушивают в боксе в течение 5— 15 мин до полного высыхания поверхности питательной среды.
8.6 После застывания среды чашки с посевами, переворачивают вверх дном и культивируют в
термостате в аэробных условиях при температуре (30
±
1) °С в течение 72 ч.
8.7 Учет колоний ведут каждые 24 ч, фиксируя предварительный результат по каждому посеву с
последующим окончательным учетом через 72 ч.
8.8 После культивирования посевов подсчитывают количество колоний, выросших на чашках
Петри. При подсчете количества микроорганизмов учитывают все выросшие колонии. Подсчет
проводят невооруженным глазом или с помощью лупы. Для подсчета отбирают чашки Петри, на
которых выросло от 10 до 300 колоний.
8.9Еслиподсчетколонийзатрудненналичием«сливныхколоний»,образованных
микроорганизмами, имеющими ползучий рост, то учет колоний ведут в зависимости от части
пространства чашек Петри, занятого такими колониями. Если ползучий рост наблюдается менее чем на
четверти чашки, то колонии подсчитывают на другой части чашки и рассчитывают по их количеству
общее количество колоний в чашке. Посредством интерполяции выводится теоретическое число,
которое должно соответствовать числу микроорганизмов на всей чашке.
Пример — 1/5 чаш
к
и занята
к
олониями, имеющими ползучий рост. На остальной части чаш
к
и
(4/5) содержится 19
к
олоний. Теоретичес
к
ое число
к
олоний на чаш
к
е 19:4/5 = 23,75. Количество
ми
к
роорганизмов в пробе рассчитывают в соответствии с разделом 9.
Если ползучий рост микроорганизмов отмечается более чем на одной четверти чашки Петри, то
подсчет на такой чашке не проводится. Колонии микроорганизмов, образующих ползучий рост, но
выросших в форме цепочек, учитывают как одну колонию.
3