ГОСТ 33774—2016
[27]. Полученная степень жесткости должна быть эквивалентна 100-300 мг/л СаСОэдля предупрежде
ния чрезмерного осаждения карбоната кальция. Можно использоватьдругую хорошо охарактеризован
ную поверхностную или родниковую воду. Восстановленную воду можно адаптировать к технической
воде с низкой жесткостью разведением деионизированной водой в соотношении 1:5 с обеспечением
минимальной жесткости 30-35 мг/л СаС03. Воду аэрируют для насыщения кислородом перед добав
лением испытуемого вещества. Температура в лунках должна поддерживаться на уровне (26 ± 1) °С в
течение всего испытания. Значение pH должно находиться вдиапазоне от pH 6.5 до 8.5 и не изменяться в
пределах этого диапазона более чем на 1,5 единицы во время испытания. Если предполагается, что
значение pH не будет находиться в данном диапазоне, то доведение pH проводят до начала испытания.
Доведение pH проводят таким образом, чтобы существенно не изменялась концентрация стокового
раствора и чтобы не была спровоцирована химическая реакция или осаждение испытуемого вещества.
Рекомендуется использовать соляную кислоту (HCI) и гидроксид натрия (NaOH) для доведения pH в
растворах, содержащих испытуемое вещество.
6.4 Испытуемые растворы
Испытуемые растворы с выбранными концентрациями можно приготовить, например, разведени
ем стокового раствора. Стоковые растворы предпочтительно готовят простым смешиванием или пере
мешиванием испытуемого вещества в воде для разведения с использованием механических средств
(например, мешалки и/или обработкой ультразвуком). Если испытуемое химическое вещество трудно
растворимо в воде, то следует придерживаться процедур, описанных в Руководстве по работе с веще
ствами. с которыми трудно проводить манипуляции [28]. Следует избегать использования растворите
лей, но в некоторых случаях их применяют для получения достаточно концентрированного
стокового раствора. Если растворитель используется для облегчения приготовления стокового
раствора, то его конечная концентрация не должна превышать 100 мкл/л и должна быть одинаковой
во всех испытуе мых сосудах. При использовании растворителя требуется включить дополнительный
контроль на рас творитель.
6.5 Содержание родительского стада рыб
Для яйцекладки используют родительское стадо, не подвергавшееся какому-либо воздействию,
данио-рерио дикого типа с хорошо известным уровнем продукции икры. У рыбы должны отсутствовать
внешние симптомы инфекций и заболеваний, и рыба не должна подвергаться обработке фармацевти
ческими препаратами (в лечебных или профилактических целях) за два месяца до нереста. Разведе
ние рыбы в аквариумах проводится с рекомендуемым уровнем загрузки из расчета 1 л воды на рыбу и
установленным 12-16-часовым световым периодом [29}—[33]. Следует отрегулировать оптимальную
скорость фильтрации; необходимо избегать избыточной скорости фильтрации, что может вызвать силь
ное возмущение воды. Режим кормления см. в приложение А. Следует избегать избыточного кормле ния.
регулярно контролировать качество и чистоту воды в аквариумах и при необходимости приводить в
исходное состояние.
6.6 Подтверждение квалификации
В качестве стандартного вещества испытывают 3.4-дихлоранилин (использованный в испытаниях
по валидации [1]. [2]) по всему диапазону зависимости «концентрация — эффект» для проверки чув
ствительности используемого штамма рыбы предпочтительно два раза в год. В каждой лаборатории
перед первоначальной постановкой испытания используют стандартное химическое вещество. Лабора
тория может использовать это химическое вещество для подтверждения своей технической компетент
ности в выполнении испытания до представления результатов регулирующим органам.
6.7 Яйцекладка
6.7.1Икра данио-рерио может быть получена с использованием нерестовых групп (в отдельных
резервуарах для нереста) или с использованием массового нереста (в технических резервуарах). В слу
чае нерестовых групп самцов и самок (например, в соотношении 2:1) в родительской группе помещают в
резервуары для нереста за несколько часов до наступления темноты за день до испытания. Посколь ку
нерестовые группы данио-рерио иногда могут не нереститься, рекомендуется использовать парал
лельно не менее трех резервуаров для нереста. Для предупреждения генетических изменений икру
собирают минимум из трех родительских групп, смешивают и произвольно отбирают.
4