ГОСТ 33774—2016
Окончание таблицы 1
Время воздействия
24 ч48 ч72 ч98 ч
Неотделениехвоста
44++
Отсутствие сердцебиения
+++
7.6.2 Коагуляция: коагулированные икринки имеют молочно-белый цвет и выглядят темными под
микроскопом (см. приложение Г. рисунок Г.1). Количество коагулированных икринок определяют через
24 ч. 48 ч, 72 ч и 96 ч.
7.6.3 Отсутствие формирования сомитов: у нормально развивающихся эмбрионов данио-рерио
при (26 ± 1) °С формируется примерно 20 сомитов в течение 24 ч (см. приложение Г. рисунок Г.2).
У нормально развивающегося эмбриона имеются спонтанные движения (маятниковые сокращения).
Спонтанные движения указывают на формирование сомитов. Отсутствие сомитов регистрируют через
24 ч, 48 ч. 72 ч и 96 ч. Отсутствие формирования сомитов через 24 ч может быть связано с общей за
держкой развития. Самое позднее через 48 ч должно быть обнаружено формирование сомитов.
Если оно отсутствует, то эмбрионы считают погибшими.
7.6.4 Неотделение хвоста: у нормально развивающихся эмбрионов данио-рерио отделение хво
ста (см. приложение Г. рисунок Г.З) от желтка наблюдают после удлинения тела эмбриона. Отсутствие
отделения хвоста регистрируют через 24 ч, 48 ч, 72 ч и 96 ч.
7.6.5 Отсутствие сердцебиения: у нормально развивающихся эмбрионов данио-рерио при (26 ± 1) “С
сердцебиение просматривается через 48 ч (см. приложение Г, рисунок Г.4). Следует обратить особое
внимание на регистрацию данной конечной точки, поскольку нерегулярное (непостоянное) сердцебие
ние не следует рассматривать в качестве показателя гибели эмбриона. Кроме того, видимое сердцеби
ение без кровообращения в брюшной аорте не считается признаком гибели. Для регистрации данной
конечной точки эмбрионы без сердцебиения следует исследовать при минимальном 80-кратном увели
чении не менее одной минуты. Отсутствие сердцебиения регистрируют через 48 ч. 72 ч и 96 ч.
7.6.6 Скорость вылупления во всех обработанных и контрольных группах регистрируют, начиная с
48 ч и далее, и результаты приводят в отчете. Хотя вылупление не является конечной точкой, использу
емой для расчета LC50. вылупление обеспечивает воздействие на эмбрион без наличия потенциальной
барьерной функции хориона и. таким образом, способствует интерпретации данных.
7.6.7 Подробное описание нормального развития (35) и примеры аномального развития эмбрио
нов данио-рерио приведены в приложениях Б и Г.
7.7 Аналитические определения
7.7.1 В начале и в конце испытания измеряют pH. общую жесткость и проводимость в контроле(ях)
при самой высокой испытуемой концентрации химического вещества. В полустатических обновляемых
системах pH измеряют до и после обновления воды. Концентрацию растворенного кислорода
измеря ют в конце испытания в отрицательных контролях и при самой высокой испытуемой
концентрации с жизнеспособными эмбрионами, где она должна соответствовать критериям
достоверности испытания (см. 5е). Если имеется опасение в том. что температура различается в 24-
луночных планшетах, то тем пературу измеряют в трех произвольно отобранных сосудах.
Предпочтительно температуру регистри руют непрерывно во время испытания или как минимум
ежедневно.
7.7.2 В статической системе концентрацию испытуемого вещества измеряют как минимум при са
мой высокой и самой низкой испытуемых концентрациях, но предпочтительно во всех обработках в на
чале и в конце испытания. В полустатическом испытании (с обновлением), где. как ожидается,
концентра ция испытуемого вещества сохраняется в пределах ± 20 % от номинальных значений,
рекомендуется как минимум измерять самую высокую и самую низкую испытуемые концентрации при
условии недавнего приготовления и непосредственно перед обновлением. Для испытаний, где
концентрация испытуемого вещества, как ожидают, не сохраняется в пределах ± 20 % от номинальной,
все испытуемые концентра ции измеряют при условии недавнего приготовления и непосредственно
перед обновлением. В случае недостаточного объема для анализа может быть полезным объединение
испытуемых растворов или ис пользование суррогатных камер из того же материала и имеющих тот же
объем по отношению к площади поверхности, как 24-луночные планшеты. Настоятельно рекомендуется,
чтобы результаты основывались
7