ГОСТ 33774—2016
6.7.2Для сбора икры нерестовые ловушки помещают в резервуары для нереста или технические
резервуары до наступления темноты за день до испытания или до появления света в день испытания.
Для предупреждения поедания икры взрослыми особями данио-рерио нерестовые ловушки покрывают
инертной проволочной сеткой с соответствующим размером отверстий [примерно (2 ± 0.5) мм]. При
необходимости искусственные растения из инертного материала (например, из пластика или стекла)
можно прикрепить к сетке в качестве стимула для нереста [3J—{5]. [23]. [35]. Для этих целей используют
атмосферостойкие пластиковые материалы, которые не выщелачиваются (например, фталаты). Спа
ривание. нерест и оплодотворение проходят в течение 30 мин после появления света, и нерестовые
ловушки с собранной икрой осторожно удаляют. Рекомендуется промыть икру восстановленной водой
после сбора из нерестовых ловушек.
6.8 Дифференциация икры
При 26 °С оплодотворенная икра подвергается первому делению примерно через 15 мин. и в
результате последовательных синхронных делений образуются 4-. 8-. 16- и 32-клеточные бластомеры
(приложение Б, [35]). На этих стадиях оплодотворенную икру можно четко идентифицировать по раз
витию бластулы.
7 Проведение испытания
7.1 Условия воздействия
Двадцать эмбрионов на каждую концентрацию (один эмбрион на лунку) подвергают воздействию
испытуемого вещества. Воздействие должно быть таким, чтобы ± 20 % от номинальной концентрации
химического вещества поддерживалось на протяжении всего испытания. Если этого невозможно достичь в
статической системе, то используют контролируемые полустатические системы, обновляемые через
определенные интервалы (например, обновление каждые 24 ч). В этих случаях концентрации, использо
ванные для воздействия, проверяют как минимум для самой высокой и самой низкой испытуемых кон
центраций в начале и в конце каждого интервала воздействия (см. 7.7.2). Если концентрация воздей
ствия. составляющая ± 20 % от номинальной концентрации, не может быть обеспечена, то проверяют
все концентрации в начале и в конце каждого интервала воздействия (см. 7.7.2). При обновлении следует
соблюдать осторожность, чтобы эмбрионы оставались покрытыми небольшим количеством «старых» ис
пытуемых растворов для предупреждения высыхания. Дизайн испытания можно адаптировать, чтобы он
соответствовал требованиям испытания конкретных веществ (например, проточные системы [24] или си
стемы с пассивным дозированием [25] для легко деградируемых или высоко адсорбирующихся веществ
[29] или для летучих веществ [36]. [37]). В любом случае следует проявлять осторожность для миними
зации любого стресса для эмбрионов. Испытательные камеры выдерживают в течение не менее 24 ч с
испытуемыми растворами до начала испытания. Условия испытаний приведены в приложении А.
7.2 Испытуемые концентрации
7.2.1 Обычно для соответствия статистическим требованиям должно быть пять концентраций ис
пытуемого вещества, различающихся не более чем в 2.2 раза. Если используют менее пяти концен
траций. то приводят обоснование такогодизайна. Предпочтительно, чтобы самая высокая испытуемая
концентрация приводила к 100 % гибели, а самая низкая испытуемая концентрация не вызывала ви
димых токсических эффектов, как это определено в 7.6.1. В устанавливающем диапазон испытании до
проведения окончательного испытания имеется возможность выбрать соответствующий диапазон кон
центраций. Устанавливающее диапазон испытание обычно проводят с использованием десяти эмбрио
нов на каждую концентрацию. Следующие указания относятся к проведению испытания в 24-луночмых
планшетах. Если используют разные испытательные камеры (например, небольшие чашки Петри) или
проверяют больше концентраций, то указания следует соответствующим образом скорректировать.
7.2.2 Подробное описание и иллюстративные указания для распределения концентраций в 24-лу-
ночных планшетах приведены в 7.5 и приложении В. рисунок В.1.
7.3 Контроли
7.3.1Контроль на воду для разведения требуется в качестве отрицательного контроля и в качестве
внутреннего контроля в планшете. Если во внутреннем контроле в планшете имеется более чем один
мертвый эмбрион, то планшет удаляют, тем самым уменьшая количество концентраций, используемых
5